TGF-β/Smad通路与TGF-β/非Smad通路在肝脏祖细胞上皮间质化中起相互拮抗作用

摘要

目的：研究TGF-β/Smad信号通路与TGF-β/非Smad信号通路对肝脏祖细胞(HPCS)发生EMT的影响。
　　方法：1.用TGF-β1(10ng/ml)分别刺激WB-F344细胞和LE-6细胞三天，利用细胞免疫荧光观察细胞形态，用Western blotting细胞检测上皮、间质蛋白。
　　2.WB-F344和LE-6细胞用TGF-β1（10ng/ml)处理不同时间，用通过Western Blot检测MAPK信号通路和Smad信号通路的相关蛋白磷酸化水平。
　　2.非Smad通路包括ERK信号通路、JNK信号通路和MAPKP38信号通路。我们用ERK信号通路特异性抑制剂U0126、JNK信号通路特异性抑制剂SP600125和MAPKP38信号通路特异性抑制剂SB203580分别阻断三条信号通路。用等量的TGF-β1分别刺激WB-F344卵圆细胞和LE-6卵圆细胞，通过荧光显微镜、细胞免疫荧光，观察其形态学改变；通过 Western Blot技术检测EMT相关蛋白水平；
　　3.建立敲减Smad4的稳定细胞系WB-shs4和LE-6sis4,并用Western Blot进行鉴定，通过Western Blot检测P-ERK、P-c-jun和P-p38蛋白磷酸化水平以及EMT相关蛋白水平。
　　结果：1、持续给予TGF-β1（10ng/ml)刺激肝脏祖细胞三天，肝脏祖细胞的形态学并没有明显的改变，E-cadherin蛋白减低以及Vimentin蛋白升高都不明显。2、TGF-β可同时激活非Smad信号通（MAPK信号通路）和Smad信号通路3、TGF-β/非Smad信号通路被抑制时，TGF-β/Smad信号通路产生的效应明显增强：形态学明显的改变，肌动蛋白细胞骨架的重组，E-cadherin蛋白明显降低以及Vimentin蛋白明显升高与对照组相比。
　　2、TGF-β可同时激活非Smad信号通（MAPK信号通路）和Smad信号通路
　　3、TGF-β/非Smad信号通路被抑制时，TGF-β/Smad信号通路产生的效应明显增强：形态学明显的改变，肌动蛋白细胞骨架的重组，E-cadherin蛋白明显降低以及Vimentin蛋白明显升高与对照组相比。
　　4、敲减Smad4的稳定细胞系WB-shs4和LE-6shs4与对照组WB-F344和LE-6相比：P-ERK、P-c-jun和P-p38蛋白磷酸化水平上调，E-cadherin蛋白表达升高以及Vimentin蛋白表达下降。
　　结论：TGF-β可通过Smad信号通路诱导EMT，但效果不明显，而且我们还发现在肝脏祖细胞中TGF-β可通过激活非Smad信号通（MAPK信号通路）从而来抑制TGF-β通过激活Smad信号通路引起的EMT，这两种通路在肝脏祖细胞发生EMT中起相互拮抗作用，这种发现有助于当前干细胞基础治疗，可能有助于肝纤维化或肿瘤靶向治疗。

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英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

一、材料

二、实验方法

结果

1.TGF-β可诱导肝脏祖细胞发生EMT

2.TGF-β激活Smad 信号通路

3.TGF-β通过激活Smad 信号通路诱导肝脏祖细胞发生EMT

4.TGF-β激活非Smad 信号通路（MAPK信号通路）

5.在肝脏祖细胞中TGF-β/非Smad通路拮抗TGF-β/Smad通路诱导的EMT

6.TGF-β/Smad通路拮抗TGF-β/非smad通路

7.TGF-β通过非Smad通路（MAPK信号通路）激活smad3 linker端

8.TGF-β通过非Smad通路激活Smad3的linker端，从而来抑制Smad3的C端的活化。

讨论

结论

参考文献

综述: 肝脏祖细胞（HPCs)的研究进展

致谢