MBD2缺失通过减少M2型巨噬细胞的极化保护博来霉素诱导的小鼠肺纤维化

摘要

特发性肺纤维化(IPF)是慢性进行性肺疾病，以肺间质与肺泡腔内纤维化和炎性细胞浸润混合存在为病理特征，会导致过度的细胞外基质(ECM)累积，并最终造成呼吸衰竭。尽管已经确认遗传因素与环境因素是其危险因素，但具体病因与致病机制还不清楚。表观遗传学是与DNA序列无关的基因表达可遗传变化，DNA甲基化是一种重要的表观遗传学机制，其改变通常发生于机体对外界环境作出反应时调控基因表达。DNA甲基化组的改变通过一种保守的甲基-CpG-结合域(MBD)蛋白家族解读，如 MBD2，其与甲基化 DNA的结合能力最强。
　　目的：探讨MBD2在肺纤维化中的作用及其可能的机制。
　　方法：在人体组织中运用免疫荧光检测IPF患者的支气管肺泡灌洗液(BALF)中MBD2的表达。在动物实验中以气道滴注博来霉素(BLM)的方法建立肺纤维化模型。WT小鼠与MBD2-/-小鼠随机分为四组：WT小鼠+生理盐水组，WT小鼠+BLM组，MBD2-/-小鼠+生理盐水组，MBD2-/-小鼠+BLM组。用HE，天狼星红与Masson染色评价肺损伤与纤维化程度。qPCR和Western Blot分别检测野生型小鼠和MBD2-/-小鼠中MBD2的表达。qPCR与Western Blot检测肺组织中collagen I， fibronectin，TGF-β1，FIZZ1，CD206，Arg-1，SOCS1与 SOCS3的表达量。细胞实验中，提取WT小鼠与MBD2-/-小鼠的腹腔巨噬细胞，IL-4或PBS分别刺激24小时，qPCR检测刺激前后FIZZ1，CCL17，SOCS1与SOCS3的表达水平。
　　结果：IPF患者的BALF中，MBD2高表达于浸润的M2型巨噬细胞。动物实验中，发现 MBD2在肺纤维化模型中明显升高，组织学分析显示 BLM处理组中MBD2-/-小鼠的肺损伤与纤维化程度轻于 WT小鼠；MBD2-/-小鼠肺组织中collagen I，fibronectin，TGF-β1，FIZZ1，CD206，Arg-1的表达水平低于WT小鼠，而SOCS1与SOCS3的表达量高于WT小鼠。IL-4刺激后，MBD2-/-小鼠的腹腔巨噬细胞中FIZZ1，CCL17的表达水平低于WT小鼠，而SOCS1与SOCS3的表达量高于WT小鼠。对照组均未表现出统计学差异。
　　结论：MBD2缺失可能通过减少M2型巨噬细胞的极化，减轻BLM诱导的小鼠肺纤维化，参与肺纤维化的发病机制。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

第1章 绪论

1.1 肺纤维化

1.2 肺纤维化的发病机制

1.3 巨噬细胞

1.4 巨噬细胞在肺纤维化中的作用

1.5 表观遗传学与表观遗传学介质 MBD2

第2章 材料与方法

2.1 实验动物

2.2 非暴露式气管滴注 BLM诱导肺纤维化

2.3 小鼠取材步骤

2.4 小鼠基因型鉴定

2.5蛋白质免疫印迹(Western Blot)

2.6 常规染色方法与组织学分析

2.7实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-time PCR, qPCR)

2.8 免疫荧光双染

2.9 小鼠腹腔巨噬细胞的分离

2.10 统计学分析

第三章 实验结果

3.1 特发性肺纤维化患者支气管肺泡灌洗液中 MBD2表达升高

3.2 MBD2基因敲除鼠的鉴定

3.3 MBD2缺失可以减轻 BLM诱导的肺损伤与纤维化

3.4 MBD2缺失减少 M2型巨噬细胞的极化

3.5 MBD2缺失增加 SOCS1/3的表达

第四章 讨论

4.1 BLM诱导肺损伤的机制

4.2 表观遗传学调控巨噬细胞分型

参考文献

综述: 表观遗传学调控在肺动脉高压中的治疗作用

主要英文缩略词表

致谢