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【6h】

Wnt/β--catenin通路在TNF--α诱导的主动脉瓣膜肌成纤维细胞向成骨细胞样表型转化的机制研究

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英文缩略词表

一、前言

二、材料和方法

1. 试剂和仪器

1.1.主要试剂

1.2.仪器

1.3.试剂配制

1.4.实验动物

2.实验方法

2.1心脏瓣膜成肌纤维细胞的分离培养

2.2 兔瓣膜肌成纤维细胞的免疫荧光鉴定

2.3 TNF-α对心脏瓣膜肌成纤维细胞细胞毒性的影响

2.4. 细胞分组和处理

2.5 ALP试剂盒检测兔心脏瓣膜肌成纤维细胞的ALP活性情况

2.6免疫蛋白印迹法(WB)检测瓣膜肌成纤维细胞中 RUNX2、α-SMA及 β-catenin表达情况

2.7逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测myofibroblast中RUNX2和β-catenin的表达情况

3.统计学分析

三、结果

1、细胞的形态和鉴定

1.1 细胞形态

1.2兔瓣膜肌成纤维细胞的免疫荧光鉴定

2、TNF-α对心脏瓣膜肌成纤维细胞细胞毒性的影响

3、ALP活性检测结果

4、Western blotting检测结果

4、PCR检测结果

四、讨论

参考文献

综述:钙化性主动脉瓣膜疾病的机制研究

参考文献

致谢

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