声明
1 前言
1.1 播散型卡介苗感染疾病概述
1.2 STAT1基因结构以及功能介绍
1.3 IFNγ诱导的JAK-STAT1免疫信号通路介绍
2 研究对象、材料和方法
2.1 研究对象
2.2 单基因遗传病研究策略
2.3 主要仪器和试剂
2.3.1 主要仪器
2.3.2 主要试剂
2.3.3 主要生物学分析软件
2.3.4 主要生物学分析数据库及在线网站
2.4 人外周血DNA提取以及PCR产物测序相关实验
2.4.1 盐析法提取人外周血基因组DNA
2.4.2 DNA浓度和纯度测定
2.4.3 候选致病基因突变筛查
2.4.4 PCR扩增
2.4.5DNA Sanger测序
2.5 表达载体的构建
2.5.1 单碱基定点突变
2.5.2 反应产物转化、涂板及克隆验证
2.6 细胞复苏、传代、冻存以及转染
2.6.1 细胞复苏
2.6.2 细胞传代
2.6.3 细胞冻存
2.6.4 质粒转染
2.7 蛋白质免疫印迹
2.7.1 细胞总蛋白提取
2.7.2 SDS-PAGE电泳
2.7.3 免疫印记以及化学发光（ECL）显影
2.7.4 统计分析
2.8 GFP标记的STAT1蛋白在细胞中的定位
3 实验结果
3.1 家系患者临床表型特征分析和诊断
3.2 家系致病基因突变验证及保守性分析
3.2.1 家系1患者致病基因突变位点分析
3.2.2 家系2患者致病基因突变位点分析
3.2.3 家系3患者致病基因突变位点分析
3.2.4 家系4患者致病基因突变位点分析
3.3 STAT1蛋白结构域和已知突变位点
3.4 STAT1表达载体构建和Western Blot
3.5 GFP标记的STAT1蛋白细胞定位
4 讨论
致谢
参考文献
