活血通络、清热利湿方对IgA肾病大鼠肾组织IL-13、IL-4及血清CIC的影响

摘要

目的：采用灌服牛血清白蛋白（BSA+CCL4皮下注射），以及联合脂多糖LPS尾静脉注射建立IgA肾病大鼠模型，并且给予活血通络方进行干预治疗，通过观察实验性大鼠IgA肾病模型的健康状况、24小时尿蛋白定量、血生化指标、肾脏病理结构的改变、大鼠肾组织IL-13、IL-4的表达及血清CIC的浓度的改变，以探讨活血通络、清热利湿方对IgA肾病的作用机制。
　　方法：将40只体重在180-200g的SD大鼠喂养于标准实验室的环境中，适应性饲养1周，然后随机分配成4组，分别为正常组、模型组、贝那普利组以及中药组。按照张静、李静等人[1]改良的IgA肾病大鼠模型方法进行造模，隔日灌服牛血清白蛋白BSA600mg/kg（BSA与蒸馏水按1:100配成溶液），持续12周；CCL4注射方式：CCL40.1ml+蓖麻油0.3ml进行皮下注射，每周一次，持续12周；联合LPS（第13周、第14周LPS0.05mg尾静脉注射）应用。造模成功后1周予以各组相对应的药物灌胃，持续4周，于第18周末取材，造模期间，正常组予以蒸馏水（4ml/kg）隔日灌胃，皮下注射生理盐水0.6ml，每周1次，第13周、第14周末予以0.2ml生理盐水尾静脉注射，治疗期间（15-18周），正常组与模型组予等量蒸馏水灌胃，每日1次。分别于实验的第8、12、14、18周，将大鼠饲养于代谢笼中，禁食，不禁水，收集24小时尿液，以检测其24小时尿蛋白定量。在第18周末时，禁食12小时以上，测量体重，按体重腹腔注射麻醉药，并于股动脉采血，收集血清，以检测血清CIC，取肾组织采用实时荧光定量PCR法以检测IL-13、IL-4的表达情况。
　　结果：
　　1.正常组精神正常，毛色光亮，反应灵敏，摄食及饮水均正常；模型组、贝那普利组以及中药组大鼠造模前与正常组健康状态相同，造模开始后，3组大鼠逐渐出现毛色光泽度逐渐变差、精神萎靡甚至脱毛、体重减轻、反应迟钝等症状。予以贝那普利组以及中药组相应药物治疗后，两组大鼠的精神及身体一般状况均较模型组有所改善。
　　2.与正常组相比较，模型组、贝那普利组、中药组三组大鼠24-UTP明显升高，并且有统计学意义，予以贝那普利组、中药组两组相应药物治疗后，模型组大鼠与两组相比，UTP明显增多，而贝那普利组、中药组大鼠24-UTP变化不大，无统计学意义。
　　3.正常组、模型组、贝那普利组以及中药组四组大鼠肌酐、尿素氮相比，无统计学意义。正常组大鼠血脂无异常，模型组、贝那普利组以及中药组与正常组相比，血脂明显升高，有统计学意义，模型组、贝那普利组及中药组大鼠血脂无明显变化，无统计学意义。
　　4.肾组织病理学观察。光镜：正常组肾小球大小形态正常，系膜及肾小管无明显病理改善，模型组大鼠肾小球形态较正常，但系膜及基质明显增厚，中药组及贝那普利组肾小球系膜较正常组增厚，但与模型组相比，其病理改变程度较小。免疫荧光：正常组大鼠肾组织内未观察到有免疫复合物沉积，模型组可明显观察到肾小球系膜区有绿色荧光免疫复合物沉积，贝那普利组、中药组两组均有不同程度的免疫复合物沉积，但均比模型组较轻。
　　5.RT-PCR观察IL-13mRNA、IL-4mRNA在肾组织中的表达。与正常组相比，模型组、中药组及贝那普利组肾组织中IL-13mRNA、IL-4mRNA表达明显升高；中药组及贝那普利组与模型组相比， IL-13mRNA、IL-4mRNA表达显著下降，有统计学意义；中药组与贝那普利组两组相比，IL-13mRNA、IL-4mRNA表达减少，并且具有统计学意义。
　　6.ELISA观察CIC在IgA大鼠血清中的表达。与正常组相比，模型组、中药组及贝那普利组血清中CIC含量明显升高，有统计学意义；贝那普利组及中药组与模型组相比， CIC含量显著下降，有统计学意义；中药组与贝那普利组两组相比，CIC含量变化不大，无统计学意义。
　　结论：
　　1.活血通络、清热利湿方可以改善大鼠的一般状况，降低IgA肾病大鼠的24小时尿蛋白定量，改善IgA肾病大鼠的肾脏病理损伤情况。说明活血通络方对IgA肾病具有一定的治疗作用，并且对肾脏还具有一定的保护作用。
　　2.活血通络、清热利湿方可以调节IgA大鼠肾组织IL-13mRNA、IL-4mRNA的表达及降低血清CIC浓度的作用。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 材料与方法

2 试验方法

3 统计方法

结果

2 各组大鼠24小时尿蛋白定量的比较

3 各组大鼠血生化情况的比较

4 肾组织病理学观察

5 RT-PCR观察IL-13mRNA、IL-4mRNA在肾组织中的表达

6 ELISA观察CIC在IgA大鼠血清中的表达

附图

附表

讨论

1 立题依据

2 中医理论依据

3 方药分析

4 活血通络、清热利湿方对IgA大鼠的干预作用

结论

参考文献

综述:IL-13、IL-4与Th细胞及IgA肾病关系的相关进展

致谢

个人简历