河北地区Rh弱D表型分布与基因分型研究

摘要

目的:Rh血型系统是最复杂的红细胞血型系统，在临床输血中的重要性仅次于ABO血型系统。目前已经确定的Rh系统抗原多达40多个。位于人类染色体1p34.3-36.1的RHD基因和RHCE基因分别编码Rh血型系统的抗原RhD和RhC/c、RhE/e，其中D抗原在输血医学和产科学中的意义最为显著。一般称D抗原阴性的为Rh阴性血型，D抗原阳性的为Rh阳性血型。弱D表型是指D抗原表位都存在，抗原表位无质量变化，仅仅是抗原表位数量减少，这种只是由于数量变化而导致的弱反应性D抗原，统称为弱D。有关弱D表型的分布与基因分型研究结果各地并不一致，且大部分报道集中在中国台湾人群，国内只有南方地区弱D表型的分布与基因分型研究。对于河北地区人群中Rh弱D的分布及其分子背景的研究尚不全面，因此本研究对河北人群弱D表型做了血清学鉴定，并用序列分析方法对其分子机理进行了研究。
　　Rh血型系统中最重要的抗原有5种，分别是:C、c、D、E、e抗原。其中以D抗原的免疫原性最为强烈。D抗原表达弱的红细胞可能刺激D阴性受血者产生抗体，临床上确实见到过受血者被弱D抗原致敏，发生溶血性反应的病例，这已经引起临床医护工作者与科研人员的重视。《美国输血协会血库和输血机构标准》要求对献血者的标本检验是否是弱D表型，对受血者血清中已有抗-D时，切不可输用弱D型红细胞，因该受血者血清抗-D会极快地破坏输入的弱D型红细胞，因此，揭示弱D表型的遗传背景及基因多态性，设计相应的PCR试验准确而高效地检测弱D表型，是提高临床输血安全性的重要手段。
　　本研究将对河北地区随机抽取的Rh阴性献血者血样进行血清学筛选，分析筛选出的弱D表型的分子遗传学背景。实验均在河北省血液中心配型实验室进行，通过本项目中的血清学筛选，我们可以了解河北地区Rh阴性献血者中弱D的分布比例，通过分子背景的研究，我们能够发现弱D的遗传多态性，希望能发现新的等位基因则更有意义。通过该项目的研究，将弱D的基因检测作为今后河北地区弱D表型基因分型的鉴定方法，以便于将来根据弱D抗原的分子基础，更合理有效安全的使用弱D血液。
　　方法:
　　1、用标准血型血清学方法对78000名河北省血液中心的献血者进行RhD抗原鉴定，对初筛为Rh阴性结果的，再用三种不同来源的抗D血清以抗人球蛋白方法进行RhD抗原确定。
　　2、制备基因组DNA及Rh表现型
　　采用微柱法从214例Rh阴性献血者全血中提取高纯度基因组DNA。并对其进行DNA浓度以及纯度的检测。
　　3、序列特异性引物PCR(sequence specific primers，PCR-SSP)，以HGH(human growth hormone，HGH)为内对照，对RHD基因第3、4、5、6、7、9特异性外显子进行等位基因特异性PCR扩增。将PCR产物行2.5％琼脂糖凝胶电泳后，根据PCR产物的有无以及片段的长短，判定是否存在RHD基因表位的缺失。
　　4、基因检测
　　采用天津市秀鹏生物技术开发有限公司研制的《人类红细胞RHD血型弱D、部分D基因检测试剂盒》对表位缺失样本进行分析。
　　结果:
　　1、血型血清学实验
　　在78000名河北省血液中心的献血者样本中经血型血清学方法鉴定Rh阴性的人为214例，占正常人群的比例为0.275％，35人为Rh弱D型，占正常人群的比例为0.045％。
　　2、对214例Rh阴性个体做血型血清学分型，全小因子ccee表型为88例，Ccee表型67例，ccEe表型24例，CcEe表型15例，CCee表型12例， ccEE表型8例。
　　3、PCR-SSP扩增结果显示河北汉族群体RhD阴性基因外显子存在着明显的多态性。在35例弱D样本中，30例RhD基因外显子完整，5例样本RhD基因外显子部分缺失。
　　4、在30例RhD基因外显子完整的样本中检出27例弱D15型、3例弱D24型;5例部分D缺失中，检出3例为RHD基因2-9外显子融合，表示为RHD-CE(2-9)-D;1例样本检测为D Cat.Ⅴa type2;1例样本为D Cat.Ⅵtype2。
　　结论:
　　1、在河北地区78000献血员人群中，常规血型血清学鉴定的RhD阴性者为214例，占正常人群的比例为0.275％，其中检出35例弱D型，占正常人群的比例为0.045％。
　　2、214例Rh阴性样本的Rh表现型
　　全小因子ccee表型88例，Ccee表型67例，ccEe表型24例，CcEe表型15例，CCee表型12例， ccEE表型8例。
　　3、35例弱D型中检出30例RhD基因外显子完整，其中27例弱D15型、3例弱D24型;5例样本RhD基因外显子部分缺失，其中3例为RHD基因2-9外显子融合，表示为RHD-CE(2-9)-D;1例样本检测为D Cat.Ⅴa type2;1例样本为D Cat.Ⅵ type2。
　　4、在河北地区，常规鉴定的RhD阴性的弱D型检出率为16.4％，其中主要是弱D15型，其占弱D型的77.1％。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验对象

2 实验方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 Rh血型系统的发展

致谢

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