化浊解毒活血通络法对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

摘要

目的：观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经细胞凋亡和相关蛋白Bcl-2及Bax表达的影响，从细胞凋亡相关基因角度揭示其对脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用。
　　方法：以改进后的Zea-Longa线栓法通过阻断大鼠右侧大脑中动脉制造局部梗死性脑缺血再灌注损伤模型。选取合格雄性成年SD大鼠54只，随机分配给假手术组（即正常组）、模型组、阿司匹林组（即对照组）、化浊解毒活血通络方低剂量组（简称“中药低剂量组”）、化浊解毒活血通络方中剂量组（简称“中药中剂量组”）、化浊解毒活血通络方高剂量组（简称“中药高剂量组”）六组，每组9只（n=9）。各组实验动物均于造模成功后进行神经系统功能缺损评分，并于第2天分别给予药物治疗，假手术组与模型组两组以0.9％氯化钠替代药物不给予治疗，阿司匹林组给以阿司匹林溶液灌胃，应用中药治疗的不同浓度三组大鼠分别予相应化浊解毒活血通络方中药汤剂。持续灌服治疗14天记录实验动物治疗过程中一般情况，按实验计划再次评定各组实验动物神经功能缺损程度，后迅速断头处死取各组大鼠梗死侧大脑半球脑组织分别进行HE染色，在电子光镜下拍照留图以观察脑组织缺血区域细胞形态变化，TUNEL法标记凋亡细胞统计阳性细胞数并计算凋亡率，应用荧光定量PCR法评测各组大鼠缺血侧脑组织中Bcl-2及Bax蛋白的表达。
　　结果：⑴各组用药后14天大鼠神经功能缺损评分对比显示：与模型组相比，中药高剂量组及阿司匹林组大鼠神经功能缺损程度明显降低肢体功能恢复良好，具有显著统计学意义（P＜0.05），中药中剂量及中药低剂量组无显著统计学差异（P＞0.05）；中药高剂量组大鼠神经功能缺损评分与阿司匹林组相比统计学差异无显著性（P＞0.05）；与中药低剂量组比较，中药中剂量组和中药高剂量组神经功能缺损评分普遍下降，有统计学意义（P＜0.05）；与中药中剂量组相比较中药高剂量组大鼠神经功能缺损体征改善更优（P＜0.05）。⑵Tunel染色的阳性细胞结果分析显示：与假手术组相比，其余各组细胞凋亡率均明显上升（P＜0.05）；与模型组相比，各用药组细胞凋亡率呈下降趋势（P＜0.05）；阿司匹林组与中药高剂量组无明显统计学差异（P＞0.05）；与中药高剂量组相比，中药中剂量组细胞凋亡率无明显降低（P＞0.05）。⑶Bcl-2基因阳性细胞表达结果：与假手术组比较，模型组Bcl-2基因的表达水平明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，各用药组Bcl-2基因的表达水平均升高，具有显著性差异（P＜0.05）；与阿司匹林组比较，中药三组调高Bcl-2表达效果显著（P＜0.05）；且与中药低剂量组相比，中药中剂量组和中药高剂量组Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）。⑷Bax基因阳性细胞表达结果显示：与假手术组比较，其余各组Bax基因的表达水平均升高，具有显著性差异（P＜0.05）；与模型组比较，各给药组Bax表达水平下降，有统计学意义（P＜0.05）；与阿司匹林组相比，中药低剂量组Bax表达明显处于较高水平，差异具有显著性（P＜0.05）；与中药低剂量组相比，中药中剂量组和中药高剂量组 Bax表达明显减少（P＜0.05）。
　　结论：①化浊解毒活血通络法可以改善脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损程度，减轻大鼠脑组织缺血区域的细胞损伤，促进肢体功能的恢复。②化浊解毒活血通络法对CIRI模型大鼠缺血脑组织具有一定的的神经保护作用，其机制可能与上调细胞凋亡基因Bcl-2、下调Bax表达及减少凋亡细胞数相关。

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 一般状况观察

2神经功能缺损评分

3各组HE染色结果

4 TUNEL染色的阳性细胞结果分析

5 Bcl-2基因阳性细胞表达

6 Bax基因阳性细胞表达

附图

附表

讨论

1 CIRI与模型的建立

2 Bcl-2家族与CIRI中的细胞凋亡

3 中医对CIRI的认识

4化浊解毒活血通络方立方依据及方药分析

结论

参考文献

综述: 中医药在脑缺血再灌注损伤后抗凋亡作用的研究进展

致谢

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