VEGFA和VEGFR2基因遗传多态性与上皮性卵巢癌患者临床预后关系的研究

摘要

目的：卵巢恶性肿瘤作为女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一，死亡率居妇科恶性肿瘤之首。其中最常见的卵巢恶性肿瘤为上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC），约占卵巢癌的90％。最新的统计数据显示，卵巢癌在导致女性死亡的病因中排名第五位。尽管近些年来卵巢癌的治疗手段在不断改进，使得生存率有所提高，但卵巢癌的5年生存率也仅为46%。因其发病隐匿和进展迅速，约70%的患者就诊时已发生远处转移，这是造成治疗困难的主要原因。肿瘤转移是多基因、多步骤、多阶段相互作用的级联反应；在此过程中，肿瘤新生血管形成是至关重要的环节。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是肿瘤新生血管发生过程中的主要正性调控因子。
　　VEGF是一种具有高生物活性的功能性糖蛋白，具有很强的促进血管内皮细胞分裂繁殖以及增强毛细血管通透性的能力，通过与其相应受体（VEGFR）结合而发挥生物学功能。已证实卵巢癌组织的发生发展（生长、浸润、转移等）依赖于癌组织中新生血管的形成。目前认为，VEGFA是主要介导血管生成和血管发生的异构体，且VEGFA的促血管生成作用是通过与 VEGFR2结合,引发一系列的细胞内信号通道而实现的。位于VEGFA、VEGFR2基因上的遗传多态性可能会通过改变其所编码的蛋白质的表达，进而对患者临床预后产生影响。
　　本实验目的是研究 VEGFA和 VEGFR2基因的遗传多态性与上皮性卵巢癌患者的临床预后的关系。旨在寻找影响上皮性卵巢癌患者临床预后的遗传分子标志物，为临床卵巢癌的“个体化”治疗提供参考数据，进而改进卵巢癌的治疗手段，提高其生存率。
　　方法：采用病例回顾性研究的方法，选取的病例为2001年12月至2011年12月在河北医科大学第四医院妇科进行手术治疗的287例上皮性卵巢癌患者。术前采集入选病人5ml外周静脉血，用蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取基因组 DNA，用聚合酶链式反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）的方法检测上皮性卵巢癌患者的 VEGFA基因 rs699947、rs833061、rs2010963和rs3025039以及VEGFR2基因rs1870377、rs2305948和rs2071559这7个SNP位点的基因型和等位基因型的分布情况。所有入选患者均进行了3年随访，部分患者经过5年随访。评价患者临床预后的指标有总生存时间（ overall survival， OS）和无疾病进展生存期（progression-free survival，PFS）。
　　所有数据输入Excel电子表格，建立数据库。数据分析采用SPSS22.0统计软件进行处理。用χ2检验检测各个基因型的频率分布情况以及临床相关因素指标（患者年龄、组织的分化程度、病理类型、临床分期、残余病灶的大小）与预后的关系。采用 Kaplan-Meier法进行生存分析，各因素水平间比较用Log-rank及Breslow分析的方法；用Cox regression模型方法计算相对危险度的比值比（Hazard ratio，HR）及其95%可信区间（confidence interval，CI），并进一步的分析影响预后的相关因素（患者年龄、组织的分化程度、病理类型、临床分期、残余病灶的大小）考虑在内的多因素的相互作用。P＜0.05作为有显著性差异的标准。
　　结果：
　　1.VEGFA基因的 rs699947、rs833061、rs2010963和 rs3025039及VEGFR2基因的 rs1870377、rs2305948和rs2071559这七个SNP的基因型频率分布在上皮性卵巢人群中均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）。
　　2.VEGFA基因 rs699947与EOC患者临床预后的关系：患者按复发组和未复发组分类进行分析，在3年的随访时间中C/C、A/C、A/A在复发组和未复发组的分布频率分别为56.3%、37.6%、6.1%和62.2%、34.0%、3.8%，在5年的随访时间中分别为56.6%、36.6%、6.8%和75.0%、25.0%、0%；经 Kaplan-Meier单因素分析两组差异无统计学意义（P>0.05），而Cox比例回归多因素分析亦无统计学上的差异（P>0.05）；按存活组和死亡组分类，在3年的随访时间中频率分布为60.1%、35.0%、4.9%和56.5%、37.9%、5.6%，在5年的随访时间中为71.8%、26.6%、1.6%和54.7%、38.0%、7.3%，Kaplan-Meier单因素分析和 Cox比例回归多因素分析显示均无统计学上的差异（P>0.05）。
　　3.VEGFA基因 rs833061与EOC患者临床预后的关系：患者按复发组和未复发组分类进行生存分析，在3年的随访时间中 T/T、C/T、C/C在这两组的分布频率为56.9%、37.0%、6.1%和62.2%、34.0%、3.8%，在5年的随访时间中为57.8%、35.4%、6.8%和75.0%、25.0%、0%，经Kaplan-Meier单因素分析两组比较无统计学上的差异（P>0.05），Cox比例回归多因素分析亦无统计学上的差异（P>0.05）；按存活组和死亡组分类，三种基因型在3年的随访时间中分布为60.1%、35.0%、4.9%和57.3%、37.1%、5.6%，在5年的随访时间中为71.8%、26.6%、1.6%和56.2%、36.5%、7.3%，Kaplan-Meier单因素分析和 Cox比例回归多因素分析显示均无统计学上的差异（P>0.05）。
　　4.VEGFA基因 rs2010963与EOC患者临床预后的关系：患者按复发组和未复发组分类进行分析，在3年的随访时间中G/G、C/G、C/C在这两组的分布为39.8%、42.5%、17.7%和34.0%、48.1%、17.9%；在5年的随访时间中为35.4%、44.1%、20.5%和22.5%、57.5%、20.0%，经Kaplan-Meier单因素分析两组比较无统计学意义（P>0.05），Cox比例回归多因素分析亦无统计学差异（P>0.05）；按存活组和死亡组分类，在3年的随访时间中三种基因型频率分布分别为36.2%、44.2%、19.6%和39.5%、45.2%、15.3%，在5年的随访时间中为29.7%、48.4%、21.9%和34.3%、46.0%、19.7%，Kaplan-Meier单因素分析和Cox比例回归多因素分析显示均无统计学意义（P>0.05）。
　　5.VEGFA基因 rs3025039与EOC患者临床预后的关系：患者按复发组和未复发组分类进行分析，在3年的随访时间中 C/C、C/T、T/T在这两组的分布频率为69.6%、27.1%、3.3%和69.8%、30.2%、0%，在5年的随访时间中为70.8%、26.7%、2.5%和72.5%、27.5%、0%，经Kaplan-Meier单因素分析，两组比较无差异（P>0.05），进一步的 Cox比例回归多因素分析亦无差异（P>0.05）；按存活组和死亡组分类，在3年的随访时间中三种基因型频率分布分别为69.4%、29.4%、1.2%和70.2%、26.6%、3.2%，在5年的随访时间中为71.8%、26.6%、1.6%和70.8%、27.0%、2.2%， Kaplan-Meier单因素分析和 Cox比例回归多因素分析显示均无统计学意义（P>0.05）。
　　6.VEGFR2基因 rs1870377与EOC患者临床预后的关系：患者按复发组和未复发组分类进行分析，在3年的随访时间中T/T、A/T、A/A在这两组的分布频率为29.8%、50.3%、19.9%和33.0%、49.1%、17.9%，在5年的随访时间中为27.4%、54.0%、18.6%和37.5%、40.0%、22.5%，经Kaplan-Meier单因素分析，两组比较无显著统计学差异（P>0.05），Cox比例回归多因素分析亦无显著统计学差异（P>0.05）；以存活组和死亡组分类，在3年的随访时间中三种基因型频率分布分别为27.4%、54.0%、18.6%和37.5%、40.0%、22.5%，在5年的随访时间中为32.8%、43.8%、23.4%和27.8%、54.7%、17.5%，Kaplan-Meier单因素分析和Cox比例回归多因素分析显示均无显著统计学差异（P>0.05）。
　　7.VEGFR2基因 rs2305948与EOC患者临床预后的关系：患者按复发组和未复发组分类进行分析，在3年的随访时间中C/C、C/T、T/T的分布频率为78.4%、21.0%、0.6%和72.6%、27.4%、0%，在5年的随访时间中为77.0%、22.4%、0.6%和72.5%、27.5%、0%，经Kaplan-Meier单因素分析，两组比较无统计学意义（P>0.05），Cox比例回归多因素分析亦无统计学意义（P>0.05）；按存活组和死亡组分类，在3年的随访时间中三种基因型频率分布分别为76.1%、23.9%、0%和76.6%、22.6%、0.8%，在5年的随访时间中为79.7%、20.3%、0%和74.5%、24.8%、0.7%， Kaplan-Meier单因素分析和Cox比例回归多因素分析显示均无统计学意义（P>0.05）。
　　8.VEGFR2基因 rs2071559与EOC患者临床预后的关系：患者按复发组和未复发组分类进行生存分析，在3年的随访时间中T/T、C/T、C/C的分布频率为41.4%、46.4%、12.2%和39.7%、50.9%、9.4%，在5年的随访时间中为43.5%、47.2%、9.3%和32.5%、57.5%、10.0%，经Kaplan-Meier单因素分析，两组比较无统计学意义（P>0.05），Cox比例回归多因素分析亦无统计学意义（P>0.05）；按存活组和死亡组分类，在3年的随访时间中三种基因型分布分别为39.3%、52.7%、8.0%和42.8%、41.9%、15.3%，在5年的随访时间中为37.5%、53.1%、9.4%和43.1%、47.4%、9.5%， Kaplan-Meier单因素分析和Cox比例回归多因素分析显示均无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　1.VEGFA基因的 rs699947、rs833061、rs2010963和rs3025039遗传多态性可能与中国北方妇女上皮性卵巢癌患者的复发及生存时间无关。
　　2.VEGFR2基因的 rs1870377、rs2305948和rs2071559遗传多态性可能与中国北方妇女上皮性卵巢癌患者的复发及生存时间无关。

目录

封面

声明

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 研究对象

2 临床预后的评定

3主要的实验器械及设备

4 主要的实验试剂

5 实验方法

6 统计学分析

结果

1 一般情况

2 研究对象的基本临床特征

3 VEGFA基因SNP与EOC患者临床预后（3年）的关系：

4 VEGFR2基因SNP与EOC患者临床预后（3年）的关系：

5 VEGFA基因SNP与EOC患者临床预后（5年）的关系：

6 VEGFR2基因SNP与EOC患者临床预后（5年）的关系：

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述: VEGF在上皮性卵巢癌中的相关研究进展

致谢

个人简历