土槿乙酸对NC/Nga小鼠特应性皮炎的作用及其机制研究

摘要

目的：本文研究传统中药土槿皮有效成分土槿乙酸（PB）对NC/Nga小鼠特应性皮炎（AD）的治疗作用，并初步探讨其作用机制。
　　方法：
　　1.体内研究
　　1.1 PB对NC/Nga小鼠AD的药效学研究:灌胃给药观察不同剂量的PB（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）对NC/Nga小鼠AD作用后的皮损炎症评分、体重变化、脾脏指数、血清IgE含量， H&E染色检测皮肤组织病理学变化。
　　1.2 RT-PCR法检测不同剂量PB对NC/Nga小鼠脾脏及皮肤组织中T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4、ASC、caspase-1、IL-1β、NLRP3、PPAR-γ、PPAR-δ、TLR-2、TLR-4、IL-17a、IL-17Ra、IL-22mRNA基因表达的影响。
　　1.3 ELISA法检测不同剂量PB对NC/Nga小鼠血清IgE和相关细胞因子IL-1β、IL-17和IL-22含量的影响。
　　1.4 Western-blot法检测不同剂量PB对NC/Nga小鼠脾脏磷酸化AKT(Ser473)、RSK-2及磷酸化ⅠκBα(Ser32/Ser36)蛋白表达的影响。
　　2.体外研究
　　2.1 MTT法检测PB体外对小鼠胸腺和脾脏细胞的毒性及对淋巴细胞增殖抑制作用。MTT法测定PB在体外对小鼠胸腺和脾细胞的毒性作用，并分析刀豆蛋白A（ConA）及脂多糖（LPS）诱导的小鼠T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖抑制作用。
　　2.2荧光素酶报告基因检测 PB对转染报告基因质粒的 RAW264.7细胞PPAR-γ转录激活。
　　结果：
　　1.不同剂量PB（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）灌胃给药后，中、高剂量组明显改善NC/Nga小鼠的体重下降、脾指数升高；H&E染色显示中、高剂量组能明显减轻NC/Nga小鼠的表皮增厚和水肿，减少炎症细胞浸润，以上证明PB对NC/Nga小鼠AD具有显著的治疗作用。
　　2.RT-PCR和ELISA结果显示PB能够下调炎症因子TNF-α及炎症小体NLRP3、IL-1β、Caspase-1的基因表达；抑制IL-22和IL-17a的表达和分泌；同时促进PPAR-γ和PPAR-δ基因表达；抑制TLR-2和TLR-4基因的表达以及NF-κB通路信号分子Ⅰ-κBα的活性表达；此外，PB还能明显抑制AKT活化及RSK-2表达，通过多个作用靶点，从而调节机体免疫-炎症反应网络。
　　3.MTT法检测发现，PB在体外对小鼠胸腺和脾淋巴细胞无明显的细胞毒性，IC50>1mmol/L，优于阳性药霉酚酸酯（23.22μmol/L），呈现时间-剂量依赖性地抑制ConA诱导的T细胞增殖，同时，对LPS诱导的B淋巴细胞增殖亦表现出一定程度的抑制作用，但其效应低于阳性对照药，提示 PB可能选择性抑制 T细胞活化增殖。荧光素酶报告基因分析，PB能够激活RAW264.7细胞中的PPAR-γ转录活性，上调PPAR-γ表达。
　　结论：PB对 NC/Nga小鼠 AD有良好的治疗效果，能够通过抑制 IL-1β、TNF-α、Caspase-1、TLR-2/TLR-4基因表达，降低IL-22和IL-17分泌发挥作用，其机制可能与抑制淋巴细胞活化增殖、PPAR-γ转录激活，以及下调PI3K/AKT/NF-κB信号通路有关，且其毒性显著低于阳性药。
　　因此，PB是具有良好的抗炎免疫抑制活性的中药单体，有望开发成具有自主知识产权新型药物用于治疗AD，具有广阔的研究前景。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1材料

2 方法

3 统计学处理

结果

1 PB的体外活性

2 PB对NC/Nga小鼠AD的治疗作用

3 PB对NC/Nga小鼠AD治疗机制的研究

附图

附表

讨论

1 PB对小鼠脾淋巴细胞的增殖抑制作用

2 PB对NC/Nga小鼠AD的治疗作用

3 PB治疗AD的机制分析

结论

参考文献

综述:Th22细胞在慢性炎症性皮肤疾病中的作用

致谢

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