载脂蛋白(a)基因启动区+93C＞T多态性对Lp(a)水平和大血管及小血管病变型脑梗死关系的影响

摘要

背景和目的：Lp(a)是Kare Berg于1963年发现，是存在于人血浆中的一种特殊脂蛋白。Lp(a)由脂质和蛋白质两部分组成，中心脂质类似低密度脂蛋白(LDL)核心，外周被一分子的apo(a)和一分子apoB100通过二硫键共价连接的蛋白复合物包绕。一方面它有类似LDL结构而致动脉硬化的作用，另一方面与纤维蛋白原有高度同源性而具有抗纤维蛋白溶解和促进血栓形成作用。 Lp(a)是心脑血管疾病新的危险因素。目前一致认为高水平Lp(a)是冠心病一项重要预测因子。然而在脑卒中发生中的作用仍处于争议中。冠心病主要是冠状动脉粥样硬化引起，然而脑卒中的发生却具有异源性，如大动脉粥样硬化性脑梗死(LAA)、小动脉闭塞性脑梗死(SAO)、心源性脑栓塞(CE)和其他原因脑卒中(SOE)，例如：血管炎、凝血异常及血管本身异常等。LAA主要是颅内或颅外动脉粥样硬化板块破损血栓形成有关；而SAO是由于颅内深穿支动脉脂透明膜病变引起。因此我们假设Lp(a)水平异常在LAA组中要比SAO组更为盛行，与性别和年龄相匹配对照组(CS)相比较。 血浆Lp(a)水平在不同人群间的分布也存在显著性差异。Lp(a)水平主要受控于Apo(a)基因，其水平变异与Apo(a)基因多态性有关。Apo(a)基因KringleⅣ—2重复片断多态可解释个体间Lp(a)水平变异的40％—70％。部分变异归因于Apo(a)基因编码区和转录调控区单核苷酸的多态性。Ichinose and Kuriyama研究发现Apo(a)基因5‘端侧翼序列的多态性影响Lp(a)水平。特别是位于Apo(a)基因转录起始点下游93位点的C→T突变，由于额外地引入了翻译起始密码子ATG，使Apo(a)翻译活性降低，对Lp(a)水平起到负性调节作用。人群研究发现携带LPA+93T等位基因的黑人个体，其平均Lp(a)水平比非携带者低50％—60％，此多态却对高加索人Lp(a)水平无影响。然而最近的研究发现，Apo(a)基因+93C/T多态性影响高加索中年健康人群Lp(a)的水平。另一项研究发现Apo(a)基因+93C/T多态性不仅影响高加索人群Lp(a)的水平，而且携带LPA+93T等位基因是患外周动脉粥样硬化性疾病(PAD)的独立保护因素。然而它是否是LAA独立保护因素，目前尚未见文献报道。 据我们了解，目前国内尚无研究Apo(a)基因+93C/T多态性与对Lp(a)水平和LAA及SAO关系的影响。 因此我们实验目的：(1)验证上述假设：Lp(a)水平异常在LAA组中要比SAO组更为盛行(与性别和年龄相匹配对照组相比较)。(2)评价Apo(a)基因启动区+93C/T多态性与对Lp(a)水平影响，(3)探索携带LPA+93T等位基因LPA是否是LAA的独立保护因素。(4)探讨Lp(a)与脑血管病其他危险因素(血脂、年龄、体重指数、纤维蛋白原、同型半胱氨酸、糖尿病、高血压、吸烟)之间的相关性。 研究对象： 1、脑梗死组：选取2006年9月至2008年10月在中山大学附属第三医院神经内科住院治疗的脑梗塞患者。符合以下标准：(1)“第四届脑血管病会议的脑血管疾病诊断要点”所确定的脑梗死诊断标准；并经头颅CT/MRI证实；(2)所有患者均完成颈部血管彩超、心脏彩超、头颅MRI及磁共振血管成像(MRA)，部分行数字减影血管造影(DSA)检查；(3)除外潜在的心源性栓子、短暂性脑缺血(TIA)、蛛网膜下腔出血(SAH)、脑肿瘤、血管畸形、严重的系统性疾病、内分泌及代谢性疾病(糖尿病除外)、肝肾功能不全。 LAA和SAO分型原则：应用经颅多普勒超声(TCD)、MRA、DSA、颈部血管彩超及头颅MRI，参考TOAST分型方法，符合以下条件者判定为LAA：①血管检查(TCD、MRA、DSA及颈部血管彩超)显示颈动脉、椎动脉及颅内动脉(大脑前动脉、大脑中动脉、大脑后动脉或基地动脉)闭塞或狭窄≥50％；②按血管分布区位于皮层或皮层下结构或脑干的直径>1.5cm梗死灶，典型的皮层下结构包括：放射冠、基底节、内囊。符合上述条件者共150例。符合以下条件者判定为SAO：①临床符合一种经典的腔隙性脑梗死综合症；②磁共振成像(MRI)显示位于皮层下结构或脑干的直径≤1.5cm梗死灶，③血管检查显示病灶同侧颅内、外血管正常或狭窄<50％。SOA患者共175例。 2、对照组：选取同期在我院眼科、整形科、耳鼻喉住院，并经检查排除脑梗塞患者(占40.8％)及我院体检中心选取无神经系统疾病且年龄、性别相匹配的体检者(占59.2％)，共244例。 方法： 1.应用苯酚和氯仿提取法提取基因组DNA，于—30℃保存。 2.以TaiⅠ为限制性内切酶，应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLPs)，琼脂糖凝胶电泳检测DNA标本Apo(a)基因+93位点基因多态性。 3.OLYMPUS AU5421大型全自动化分析仪检测血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL—C)、低密度脂蛋白(LDL—C)浓度，载脂蛋白A(apoA1)，载脂蛋白B(apoB100)。 4.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆Lp(a)浓度。 5.纤维蛋白原(Fib)测定用免疫比浊法(ITM)。 6.同型半胱氨酸(HCY)用高效液相色谱法(HPLC)。 7.使用条件Logistic回归寻找LAA及SAO的独立危险因素。 8.Lp(a)与血脂、年龄、体重指数、Fib、HCY用Pearson's相关 结果： 研究组(LAA组及SAO组)血浆Lp(a)中位数显著高于对照组(分别为25.2和19.7mg/dl，vs15.4mg/dl，P<0.0001)。无论LAA组、SAO组还是对照组，携带突变LPA+93T等位基因者血浆Lp(a)水平较非携带者显著降低(LAA组P<0.001，SAO组P=0.012，对照组P<0.001)。在LAA组中，携带LPA+93T等位基因频率显著低于对照组(OR=0.58，95％CI=0.38-0.87，p=0.008)，而SAO组与对照组比较无统计学差异(P=0.6)。但经多元回归分析显示，携带LPA+93T等位基因对减少LAA发病风险无统计学意义(OR=0.78，95％CI0.43-1.47 P=0.42)。在LAA组中Lp(a)与Fib和apo(B)成正相关，相关系数分别为(r=0.182，p=0.035；r=0.266 P=0.001)。但在SAO组Lp(a)与CHOL、LDL—C及apo(B)成正相关，相关系数分别为(r=0.226，p=0.003；r=0.197，p=0.009及r=0.199，p=0.008)。无论是在LAA组还是SAO组Lp(a)与脑血管病其他危险因素(其他血脂、年龄、体重指数、HCY、糖尿病、高血压、吸烟)无相关性。 结论： 1.我们的研究结果支持高水平Lp(a)是LAA同时也是SAO独立危险因素。 2.携带突变LPA+93T等位基因者血浆Lp(a)水平较非携带者显著降低，但不能减少LAA发病风险。 3.在LAA患者中Lp(a)与Fib和apo(B)正相关；而在SAO患者中Lp(a)与CHOL、LDL—C及apo(B)正相关。 4.Lp(a)与脑血管病其他危险因素(年龄、体重指数、HCY、糖尿病、高血压、吸烟)无相关性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:中英文缩略词汇表

声明

摘要

1.1背景和目的

1.2实验对象

1.3试剂和仪器

1.4方法

1.5统计学分析

1.6结果

1.7讨论

参考文献

Abstract

2.1 Introduction

2.2 Subjects and Method

2.3 Biochemical analysis

2.4 Statistical Analysis

2.5 Results

2.6 Discussion

2.7 Acknowledgments

致谢

研究生期间论文发表