氨茶碱对T淋巴细胞自噬、凋亡及胀亡调控作用的实验性研究

摘要

氨茶碱用于治疗支气管哮喘已有50多年的历史，其解除支气管痉挛的作用已为临床公认，对其作用机制的认识在不断深入。传统认为茶碱类药物抑制磷酸二脂酶活性，使细胞内cAMP增高从而引起支气管扩张，而近年的研究表明氨茶碱还有广泛的抗炎及免疫调节作用。目前已有很多实验证实提高细胞内cAMP水平的化合物可单独或联合作用诱发细胞凋亡。更有研究证实氨茶碱可以增加Jurkat和HL—60细胞的凋亡率及可促进哮喘气道T淋巴细胞的凋亡。因此，推测氨茶碱可能通过诱导免疫细胞程序性死亡来发挥免疫调节作用。 过去，人们一直认为多细胞生物细胞死亡只有细胞坏死和细胞凋亡两种，后者指细胞遵循自身的程序，自己结束其生命，最后细胞裂解为若干凋亡小体而被其它细胞吞噬。实际上凋亡只是程序性细胞死亡的方式之一，又称为Ⅰ型程序性细胞死亡，目前已经发现尚存在的其他细胞死亡方式，如自噬、胀亡等。自噬被称为Ⅱ型程序性细胞死亡，是一种胞质降解过程，负责清除包括细胞器在内的胞质组分，其标志性步骤是内质网来源的分离膜包裹住待降解部分形成自噬小体。有研究认为，T淋巴细胞及其亚群通过自噬来达到免疫稳态。而细胞胀亡是以细胞肿胀、核溶解为特征的被动性细胞死亡。一般认为，机体依靠凋亡方式来精确地控制组织内细胞的数量，维持其正常结构和形态；通过胀亡来大规模清除一些过多的组织内细胞。介导凋亡的死亡受体，如TNFR与其配体（TNF、FasL、抗Fas）结合后也介导胀亡的发生。这提示凋亡和胀亡可能还存在某些共同的信号途径，它们的早期阶段具有共同机制，胀亡可能是凋亡在某种情况下不能完成其正常程序的结果。 研究目的：因而，本实验拟通过检测氨茶碱干预后小鼠脾T淋巴细胞凋亡、自噬及胀亡的情况，分析氨茶碱对T淋巴细胞死亡方式的影响，期待为氨茶碱作用机制提供新思路。 研究方法： 1．分离10只健康小鼠脾T淋巴细胞，分对照组及氨茶碱组（4个浓度梯度组，即1mg/L、5mg/L、25mg/L、125mg/L）置37℃，5％ CO2培养箱中培养，收集72h细胞以流式细胞仪技术检测其凋亡、自噬、胀亡情况。 2．25只健康小鼠随机分对照组及不同浓度氨茶碱组（分别为1 mg/kg、5 mg/kg、25mg/kg、125mg/kg），氨茶碱组小鼠分别予不同浓度氨茶碱灌胃、对照组予等量生理盐水灌胃干预10天，分离小鼠脾T淋巴细胞，以流式细胞仪技术检测其凋亡、自噬、胀亡情况。 结果： 1．不同浓度梯度氨茶碱体外培养对小鼠脾T淋巴细胞的影响 ①125mg/L、25mg/L、5mg/L浓度氨茶碱组与阴性对照组比较，差异均有显著性，自噬率均下降，P<0．05，提示氨茶碱可诱导小鼠脾T淋巴细胞自噬率下降。 ②125mg/L、25mg/L、5mg/L浓度氨茶碱组T淋巴细胞凋亡率与阴性对照组比较有所升高，差异有显著性，P<0．05，提示氨茶碱可诱导T淋巴细胞凋亡。 ③各浓度氨茶碱组T淋巴细胞胀亡率与阴性对照组比较，差异均无显著性，P>0．05，提示氨茶碱对小鼠脾T淋巴细胞胀亡无影响。 2．不同浓度梯度氨茶碱灌胃干预对小鼠脾T淋巴细胞的影响 ①各浓度氨茶碱组与阴性对照组比较，差异均有显著性，自噬率均下降，P<0．05，提示氨茶碱可诱导小鼠脾T淋巴细胞自噬率下降。 ②25mg/kg浓度氨茶碱组T淋巴细胞凋亡率与阴性对照组比较有所升高，差异有显著性，P<0．05，其余浓度组比较则无显著差异。 ③各浓度氨茶碱组T淋巴细胞胀亡率与阴性对照组比较，差异均无显著性，P>0．05，提示氨茶碱对小鼠脾T淋巴细胞胀亡无影响。 结论： 1．小剂量氨茶碱可能通过抑制T淋巴细胞的自噬来发挥其支气管扩张以外的免疫调节作用。 2．氨茶碱可增加小鼠脾T淋巴细胞的凋亡率。可以认为氨茶碱诱导T淋巴细胞程序性死亡的方式并非单一并且相互独立。 3．氨茶碱不能诱导小鼠脾T淋巴细胞胀亡。

目录

文摘

英文文摘

声明

引 言

材料和方法

结 果

讨 论

结 论

创新之处

参考文献

致 谢