AT1受体拮抗剂Candesartan对AngⅡ促原代AML细胞增殖的拮抗作用及机制

摘要

研究背景:
　　 不断探讨急性白血病新的发病机制并针对其机制进行个体化的靶向治疗成为目前急性白血病基础研究和临床治疗的热点。近年研究发现肾素-血管紧张素系统与急性白血病的发生有关，Koca E[1]等报道白血病K562细胞株表达肾素、血管紧张素转化酶、血管紧张素原及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)。2007年Beyazit Y[2]等报道在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中存在着肾素、血管紧张素转化酶及血管紧张素的过表达。Casares MT[3]等研究肾素与急性髓系白血病(AML)的相关性时发现，在肾素阳性表达的AML患者中，化疗完全缓解(CR)时肾素表达消失，在复发时肾素再次表达;在化疗不敏感肾素阳性表达的AML患者中肾素持续表达。以上研究均说明肾素-血管紧张素系统在急性白血病发病中可能起重要作用。
　　 进一步研究其机制发现血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)通过血管紧张素Ⅱ1型受体途径促进白血病K562细胞株增殖及促进其自分泌VEGF，上调肿瘤血管新生。有学者研究报道AngⅡ经其AT1R促进胃癌MKN-28细胞株分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)增加[4]，而基质金属蛋白酶降解基质对血管生成、肿瘤侵袭和转移至关重要[5]，有研究表明MMP-2、MMP-9表达程度的高低与肿瘤分级、分期相关[6]；Ishimatsu S[7]等研究发现AngⅡ激活AT1R后通过PI3K/AKT等信号途径增强绒毛膜癌BeWo细胞株迁移和侵袭。以上研究说明AngⅡ经其AT1受体促进细胞因子分泌增加及调节各种信号传导途径来调控肿瘤细胞生长、侵袭；然而AngⅡ是否也通过激活AT1R后经PI3K/AKT信号途径的级联反应促进白血病细胞的增殖，目前研究极少见。针对肾素-血管紧张素系统在急性白血病发病中起的作用，2009年De la Iglesia[8]报道使用血管紧张素转换酶抑制剂群多普利、AT1受体拮抗剂氯沙坦体外对白血病细胞株K562、HL60、U937、 KU812具有抑制细胞增殖及促进其凋亡作用，并证实其抑制细胞增殖不依赖于C-myc、bcl-2基因表达的下降，其促细胞凋亡作用也不是通过下调C-myc、bcl-2、bcl-X基因表达来实现，其机制可能与这些药物阻断血管紧张素Ⅱ经AT1受体激活Smad有关;但AT1受体拮抗剂能否对原代AML细胞起作用仍少见报道。
　　 2009年Kosugi M[6,9，10]等报道在膀胱癌动物模型中显示AT1受体拮抗剂联合紫杉醇、顺铂具有协同抗肿瘤作用，AT1受体拮抗剂联合化疗药是否也能对原代AML细胞具有协同抑制增值作用的研究也少见。
　　 根据现有的研究基础，因此本研究旨在探讨AT1R受体拮抗剂Candesartan对AngⅡ促原代AML细胞增殖的拮抗作用及机制，进一步观察联合化疗药体外对白血病抑制增殖情况，为将来进一步可能的临床联合用药提供依据。
　　 研究目的:
　　 本研究观察AngⅡ对原代急性髓细胞白血病患者白血病细胞增殖的影响和血管紧张素Ⅱ AT1受体拮抗剂Candesartan能否阻断这种作用，探讨其机制，进一步观察Candesartan联合化疗药体外对AML细胞抑制增殖情况，为将来进一步可能的临床联合用药提供依据。
　　 对象与方法:
　　 对象：32例除M3外成人急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓标本来自2009年02月至2010年2月我院住院及门诊初诊AML患者，其中男性18例，女性14例，中位年龄43(11-82)岁。按FAB分型标准，其中M26例，M410例，M515例，M61例，26例非恶性血液病患者正常骨髓像的骨髓为对照组，男性14例，女性12例。
　　 方法：MTT法分别观察AngⅡ对原代AML细胞、正常骨髓单个核细胞增殖的影响；AT1R拮抗剂Candesartan、AT2R拮抗剂PD123319对AngⅡ促原代AML细胞增殖的拮抗作用；流式细胞仪测定细胞凋亡；Western-blot法检测Candesartan、PI3K抑制剂LY294002对原代AML细胞AKT磷酸化的影响；Elisa法检测Candesartan及PI3K抑制剂LY294002处理前后培养上清液MMP-9水平变化；MTT法观察Candesartan联合柔红霉素对原代AML细胞细胞增殖抑制率。
　　 结论:
　　 1.AngⅡ能剂量和时间依赖性促进原代AML细胞增殖，而对正常骨髓单个核细胞增殖无此作用。
　　 2.AT1受体拮抗剂Candesartan能剂量和时间依赖性抑制AngⅡ作用下原代AML细胞增殖，而AT2受体拮抗剂PD123319无此作用。
　　 3.Candesartan对原代AML细胞无诱导凋亡作用。
　　 4.AngⅡ与其AT1受体结合经PI3K/AKT信号传导途径促进原代AML细胞增殖及其分泌MMP-9，Candesartan能明显阻断AngⅡ促进原代AML细胞增殖及其AKT蛋白的磷酸化水平及其分泌MMP-9。
　　 5.Candesartan联合柔红霉素对原代AML白血病细胞具有协同抑制增殖作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文名词缩写

声明

前言

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

第一部分 candesartan对AngⅡ促原代AML细胞增殖的拮抗作用

第二部分 candesartan拮抗AngⅡ作用下原代AML细胞增殖机制的研究

第三部分 Candesartan联合柔红霉素协同抑制AngⅡ作用下原代AML细胞增殖的作用

四、讨论

五、结论

参考文献

致谢