RNA干扰抑制CD44的表达对肺腺癌A549细胞增殖能力的影响

摘要

肺癌的发病率和死亡率近年来都有明显的增高趋势，最重要的原因就是早期诊断困难和肿瘤的早期转移及术后复发。随着分子生物学的进展，研究者们发现了许多与肿瘤预后相关的因素，如CKs蛋白、p53抑癌基因等，这些生物学标志物对肺癌患者的预后的预测都具有重要意义。而具有介导细胞粘附作用的细胞表面粘附分子在肿瘤的早期诊断、转移潜能和预后估计等方面所体现出的重要价值已被众多学者所关注。CD44是一种分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，它是一种与恶性肿瘤转移和侵袭相关的重要黏附分子[1]。研究证明CD44在浸润和转移的多种肿瘤组织中均呈阳性表达，因此，CD44被认为是恶性肿瘤细胞表面标志物之一[2]。
　　 肿瘤干细胞学说认为肿瘤组织中存在极小部分具有干细胞性质的细胞群体，它们具有自我更新能力和不定分化潜能。目前，研究者们正在不断地寻找它们存在的依据，并对其生物学特性进行研究，以便可以从众多的肿瘤细胞中将它们分离出来。在我们的前期研究中已经发现，肺腺癌A549细胞株中存在小部分具有持续增殖分裂能力的细胞，其表面抗原CD44的阳性表达率明显高于普通A549肿瘤细胞。该群CD44阳性细胞具有自我复制和分化能力，而且在裸鼠体内的成瘤能力明显强于其他细胞亚群[3]。据此我们初步认为CD44可能是肺腺癌干细胞的表面标记物之一。为了验证上述论点，我们以肺腺癌A549细胞为研究对象，通过RNAi技术，抑制其CD44表达，并对其生物学特性进行观察，以期更加深入了解CD44在肺腺癌增殖能力中所起的作用。
　　 第一章肺腺癌中CD44的表达情况及其与临床分期、肿瘤细胞分化程度及淋巴结转移的关系
　　 目的：探讨CD44在肺腺癌中的表达及其与临床分期、肿瘤细胞分化程度及淋巴结转移的关系。
　　 方法：采用免疫组织化学方法检测77例肺腺癌中CD44蛋白的表达情况，并结合临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移进行分析。
　　 结果：免疫组化结果显示：77例肺腺癌中，CD44阳性表达率是50.6％。通过对各个分类中CD44的表达情况进行分析，我们发现：(1)CD44表达与临床分期有一定的正相关，但统计学上差异无显著性，我们考虑主要和样本量不足有关；(2)CD44表达与肿瘤细胞的分化程度有显著负相关性(P＜0.05)；(3)CD44在淋巴结转移组中的表达率为77.1％，明显高于无淋巴结转移组的28.6％，统计学上有显著性正相关(P＜0.01)。
　　 第二章肺腺癌A549细胞株CD44流式分选及增殖能力检测
　　 目的：研究肺癌A549细胞中CD44表达与增殖能力的关系
　　 方法：使用流式细胞仪分选肺腺癌A549细胞株，根据CD44的表达分为CD44+和CD44-两组。MTS法和细胞计数法检测各组细胞的增殖能力。
　　 结果：CD44阳性含量是38.8％。使用MTS法测定两组细胞的生长曲线，可以发现各组细胞均有不断增殖趋势，但CD44阳性细胞的增殖速度较阴性细胞快。细胞计数图显示CD44阴性表达组的增殖能力较阳性表达组及未分选组明显减弱。第三章探索干扰抑制CD44的表达对肺腺癌A549细胞增殖能力的影响
　　 目的：验证CD44与肺腺癌A549细胞增殖能力的关系方法：运用RNAi技术抑制A549细胞CD44的表达，通过MTS法和细胞计数法检测干扰前、干扰后以及对照组的细胞增殖能力。
　　 结果：MTS显示：转染后的肿瘤细胞活力较转染前有显著下降。细胞计数显示：转染siRNA-CD44细胞的倍增速度与其他组比较，在第四天开始出现明显的减慢；转染后组的MTS和细胞计数曲线均向转染前阴性组靠拢。
　　 本研究主要结论：
　　 (1)CD44与肺腺癌的发生发展有密切关系，其表达与与肿瘤细胞的分化程度呈显著负相关性；与淋巴结转移呈显著正相关性。
　　 (2)CD44对肺腺癌A549细胞的增殖能力起到一定的促进作用，我们初步认为CD44可能是肺腺癌干细胞的表面标记物之一。

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文摘

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论文说明：中英文缩略词表

声明

引言

第一章肺腺癌中CD44的表达情况及其与临床分期、肿瘤细胞分化程度及淋巴结转移的关系

材料与方法

实验结果

讨论

第二章肺腺癌A549细胞株CD44流式分选及增殖能力检测

材料与方法

实验结果

讨论

第三章探索干扰抑制CD44的表达对肺腺癌A549细胞增殖能力的影响

第一节si RNA转染及转染效率检测

材料与方法

第二节抑制CD44表达后细胞增殖能力的检测

材料与方法

实验结果

讨论

全文总结

问题与展望

参考文献

附图

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