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奥尼罗非鱼对黄曲霉毒素B(AFB)急性、慢性中毒的反应

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声明

1前言

1.1霉菌以及霉菌毒素

1.2黄曲霉毒素

1.3罗非鱼的营养研究现状

1.4罗非鱼的AFB1中毒研究的必要性和研究意义

2罗非鱼的AFB1急性中毒反应及其半致死量

2.1前言

2.2材料与方法

2.3实验结果

2.4讨论

2.5结论

3罗非鱼的AFB1慢性中毒反应及组织中AFB1的残留

3.1前言

3.2材料与方法

3.3结果

3.4讨论

3.5结论

参考文献

致谢

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摘要

黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种由霉菌(Aspergillus flavus和A.parasiticus等)产生且毒性很强的次级代谢产物。而罗非鱼的主养区域为热带、亚热带地区,这与黄曲霉毒素污染重灾区重合。因而,本论文开展罗非鱼对AFB1的急性与慢性中毒反应的研究,进而评估罗非鱼暴露于AFB1下的安全性。
   实验Ⅰ即急性实验,通过腹腔注射毒素的形式来研究罗非鱼对AFB1的急性中毒反应以及确定其半致死剂量(LD50)。注射剂量为:0(对照组),0.625,1.25,2.5,5或10 mg AFB1/kg体重,每剂量组10尾约32~40g的罗非鱼,实验为期10天。由实验结果可知,罗非鱼对AFB1的LD50为3.1 mg AFB1/kg体重,其95%可信限为2.1~4.5 mg AFB1/kg体重。AFB1中毒后,罗非鱼表现为厌食、运动机能下降、体表变黄、鳍条和鳃盖充血、甚至死亡;解剖时发现,肝脏出现萎缩并趋于糜烂、有胆汁淤积的症状。随着AFB1注射剂量的增大,罗非鱼肝脏的丙二醛(MDA)含量显著增加,其中2.5和5 mg/kg剂量组(0.65±0.14和0.65±0.18μmol/mgprot)显著高于对照组;谷胱甘肽-S-转移酶(GST)活力则明显受抑,5 mg/kg剂量组的GST活力只有39.38±5.69 U/mgprot,仅为对照组的54%;肝体比(HSI)也相应降低,但差异不显著(P>0.05);同时,罗非鱼肌肉中的脂肪和灰分含量也略有降低。
   实验Ⅱ即慢性实验,以含AFB1的配合饲料长期饲喂罗非鱼,多角度研究罗非鱼机体受损的变化以及组织中的AFB1残留情况。本实验的AFB1由花生粕接种黄曲霉(NRRL3357)所得,饲料中的AFB1含量分别为:19(对照组),85,245,649,793或1641μg AFB1/kg饲料。每处理组3个重复,每个重复60尾罗非鱼,初始鱼重约20g;实验为期20周,每5周取样一次。由实验结果可知,膳食性AFB1会引起罗非鱼的黄曲霉毒素中毒症,且此病症严重程度与剂量、暴露时间呈正相关关系;但各组罗非鱼均未出现大量死亡。与对照组相比,饲料中含有或超过245μg AFB1/kg时会影响罗非鱼的生长;当饲料中AFB1含量达到或超过638μg/kg时,罗非鱼呈现慢性病症(HSI和血浆白蛋白、总蛋白含量显著下降,肝脏P450的EROD活力明显受抑制,肝脏中炎症细胞浸淫、嗜酸性物质增多和空泡化坏死严重)。在15周和20周的肝脏样品中,AFB1残留量与暴露的剂量、时间成正比;然而,直到20周实验结束,罗非鱼肌肉样品的AFB1残留量仍低于检测限(<1μg/kg)。所以,饲料受AFB1污染对罗非鱼的生长和机体有一定损害,但肌肉中积累量不高。

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