系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞PRKCB基因mRNA表达的研究

摘要

研究背景：系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）是一种累及全身多脏器的系统性自身免疫病，好发于育龄期女性，严重危害患者的身心健康并给患者家庭和社会造成了严重的经济负担。尽管其病因及发病机理至今尚未完全阐明，但目前普遍认为该病是由多种因素（遗传因素、环境因素、精神心理因素等）交互作用引起的，大量的流行病学调查研究表明遗传因素在SLE发生、发展中占有重要地位。
　　随着全基因组关联分析（Genome-wide association study，GWAS）和大样本、多种族候选基因研究的不断开展，目前已经发现72个易感基因/位点。其中2010年，本课题组盛宇俊等以SLE既往GWAS数据库(1,047个病例和1,205对照）为基础，从30个基因座中选择了38个非 MHC的 SNP位点，将这些SNP位点在另外两个汉族人病例对照组（3,152个病例和7,050个对照）中进行基因分型，发现新的易感位点PRKCB和8P11.2。其中，PRKCB（全称为protein kinase C beta，PKCβ）基因的单个核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism， SNP）rs16972959与 SLE易感性显著相关（OR=0.81,95％CI:0.76-0.87, P=1.35×10-9）。PKCβ在B细胞和肥大细胞中高度表达，在人类免疫性疾病中占有重要地位，已被报道参与许多不同的细胞功能。如PKCβ可以激活处于静息状态的NF-κB，通过磷酸化与NF-κB二聚体结合的的IKB，使得IKB被泛素化，在蛋白酶作用下被水解，释放与之结合的NF-κB。NF-κB从而进入细胞核与PRKCB基因启动子相结合，调节该基因转录，基因转录产物参与调节B细胞活化，诱导细胞凋亡，内皮细胞增殖等功能。PKCβ活化异常与糖尿病、自身免疫性疾病（包括SLE）等疾病的发生与发展密切相关。
　　研究目的：探讨PRKCB基因在SLE患者和正常对照中mRNA的表达情况，PRKCB基因mRNA的表达水平与SLE活动指数（SLEDAI）、rs16972959基因分型的关系，探究PRKCB基因与SLE表型之间的关系，揭示PRKCB基因在SLE发病中的相关作用机制。
　　研究方法：本研究收集60例SLE患者和62例正常对照的血样和临床相关资料。首先从血样的外周血单个核细胞（ PBMCs）中提取出 mRNA并且逆转录为Complementary DNA c(cDNA)，接着利用ABI7900型高通量荧光定量PCR技术测定外周血单个核细胞中 PRKCB基因 mRNA的表达量的情况，再提取血样 DNA并进行浓度标准化，接着通过Sequenom MassArray基因分型技术对122个样本的rs16972959位点进行处理，最后整合所有实验数据利用SPSS20.0软件对数据进行分析。
　　结果：SLE患者外周血单个核细胞中 PRKCB基因的 mRNA表达水平高于正常对照，且两者之间对比具有显著差异性（P<0.001）；SLE患者外周血单个核细胞中PRKCB基因mRNA表达水平与SLE疾病活动指数之间呈负的相关性(P<0.05, r=-0.322）；PRKCB基因表达水平与SLE临床表现中的新发皮疹、实验室检查中的蛋白尿均有统计学意义（P<0.05）；PRKCB基因的mRNA表达水平与rs16972959的基因型之间无相关性。
　　结论：PRKCB基因表达的差异提示该基因在SLE的发病机制中可能起到一定的作用。

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1 引言

2实验材料和实验方法

2.1实验对象

2.2实验试剂

2.3 实验所用仪器

2.4 实验步骤和实验方法

3 结果

3.1 SLE病例组和健康对照组的PRKCB基因在PBMC中mRNA表达水平的对比

3.2 SLE患者的PRKCB mRNA表达与SLEDAI和临床表现之间的关联

3.3 PRKCB基因mRNA表达水平与rs16972959之间的关联

4 讨论

5总结

参考文献

附录

致谢

综述:系统性红斑狼疮遗传学和表观遗传学的研究进展