声明
英文缩略词
前言
1. 前列腺癌的流行病学现状
2. 激素非依赖型前列腺癌的演变过程
3. 激素非依赖型前列腺癌的类型
4. 激素非依赖型前列腺癌发生机制的研究现状
5. 肿瘤的能量代谢特点
6. 谷氨酰胺代谢在前列腺癌中的作用
7. 谷氨酰胺酶1与前列腺癌的联系
第一部分：去势治疗通过降低能量营养物质的合成治疗激素依赖型前列腺癌的研究
1.实验材料
1.1 细胞培养
1.2 细胞活力测定
1.3液相质谱分析（liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS）及同位素示踪
1.4Western Blot
1.5qRT-PCR（quantitative real-time PCR）
1.6 引物
1.7 实验耗材
2.实验仪器
3.实验方法
3.1 细胞培养
3.2 台盼蓝活细胞计数
3.3 LC-MS测定细胞内及培养液中的代谢产物含量
3.4 13C5-谷氨酰胺示踪实验
3.5 MTS法测定细胞活力
3.6 细胞总蛋白提取及蛋白浓度测定
3.7Western Blot
3.8 细胞总RNA的提取
3.9 逆转录反应
3.10Real-time PCR扩增
3.11 统计分析
4.实验结果
4.1 ADT减少能量营养物质的合成，减缓ADPC细胞的生长，达到治疗效果
4.2 ADT导致谷氨酰胺在LNCaP细胞内堆积
4.3 ADT引起的谷氨酰胺堆积并非因为其摄取量增加所致
4.4 ADT引起的谷氨酰胺堆积是由于其无法被分解利用所致
5.小结
第二部分：谷氨酰胺代谢对激素非依赖型前列腺癌影响的研究
1.实验材料
2.实验仪器
3.实验方法
4.实验结果
4.1 AIPC的生长更加依赖谷氨酰胺
4.2 AIPC消耗更多的谷氨酰胺
4.3 AIPC 通过对谷氨酰胺利用的增加弥补葡萄糖无法有效进入 TCA 循环供能的缺陷
4.4 谷氨酰胺浓度的变化对其他物质代谢的影响在AIPC中更为显著
5.小结
第三部分：谷氨酰胺酶1在激素非依赖型前列腺癌中的表达及对其生物学功能影响的研究
1.实验材料
1.1 细胞培养
1.2 免疫组织化学
1.3 细胞转染
1.4 Transwell细胞侵袭实验
2.实验仪器
3.实验方法
3.1免疫组织化学染色（Immunohistochemistry staining,IHC）
3.2 免疫组织化学染色结果判读
3.3 细胞瞬时转染实验
3.4 Transwell细胞侵袭实验
3.5 qRT-PCR
4.实验结果
4.1 GLS1在PCa组织中高表达，并且随临床分期或病理分级的增加而表达增强
4.2 敲低GLS1减缓AIPC细胞的增殖能力
4.3 敲低GLS1减弱AIPC细胞的侵袭能力
5.小结
第四部分：谷氨酰胺酶1的两种剪接体在不同阶段前列腺癌中差异性表达的研究
1.实验材料
1.1 细胞培养
1.2IHC和Western bolt
1.3组织芯片（Tissue microarray, TMA）
1.4 动物实验
2.实验仪器
3.实验方法
3.1 细胞培养
3.2 RT-qPCR
3.3 动物实验
3.4 统计分析
4.实验结果
4.1 GLS1的两种剪接体在不同PCa细胞系中存在差异性表达
4.2 GLS1两种剪接体在不同阶段PCa人体组织中表达不同
4.3 GLS1两种剪接体的差异性表达是KGA向GAC转化的结果
5.小结
第五部分：谷氨酰胺酶1两种剪接体发生转化的潜在机制的研究
1.实验材料
1.1细胞培养
1.2染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation, ChIP）实验
1.3 基因重组实验
1.4 荧光酶素双报告基因实验
2.实验仪器
3.实验方法
3.1染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation, ChIP）
3.2 ChIP-seq以及ChIP-qPCR
3.3 基因重组实验
3.4 质粒点突变
3.5 荧光酶素双报告基因实验
4.实验结果
4.1 转录因子AR通过3’UTR调控GLS1的表达
4.2 AR介导GLS1剪接为KGA，而非GAC
5.小结
第六部分：谷氨酰胺酶1两种剪接体的转换对前列腺癌进展的影响及治疗新靶点的选择的研究
1. 实验材料
1.1 细胞培养
1.2 GAC过表达实验
1.3 短发夹RNA（shRNA）
2. 实验仪器
3. 实验方法
3.1 GAC过表达稳定细胞系的构建
3.2 shRNA基因低表达载体的构建及细胞感染
3.3 去除/添加过量葡萄糖/谷氨酰胺对细胞生长影响的实验
3.4 CB-839半抑制浓度（IC50）的测定
3.5 动物实验
4. 实验结果
4.1 过表达GAC促使LNCaP细胞抵抗ADT
4.2 过表达GAC通过对谷氨酰胺利用的增强增加LNCaP细胞对ADT的抵抗
4.3 GAC是AIPC潜在的治疗靶点
5. 小结
讨论
结论
参考文献
附录
致谢
综述:Management of therapeutic-resistant prostate cancer by bypassing androgen receptor axis pathway
References
