从微藻中筛选抗肿瘤活性藻株及活性物质的分离纯化研究

摘要

海洋微藻是海洋蕴藏的丰富资源之一，微藻抗肿瘤活性物质已成为新的研究热点。本文采用细胞毒活性筛选模型，筛出了对肿瘤细胞系Hela有细胞毒活性的微藻10株：等鞭金藻H29(Isochrysis galbana Parke H29)、等鞭金藻3011(Isochrysis galbana Parke 3011)、等鞭金藻8701(Isochrysis galbana Parke 8701)、扁藻(Platymonas subcordiformis)、小球藻fChlorella saccharophila)、三角褐指藻(Phaeodactylum tricormutum)、牟氏角毛藻fChaetocorepos muelleri)、盐藻(Dunaliella)、鱼腥藻(Anabaena，淡水藻)、栅藻(Scenedesmus，淡水藻)。由实验结果表明等鞭金藻H29的7种萃取液对Hela细胞均表现出了极强的抑制作用，抑制率分别为：环己烷－90.32％、乙酸乙酯93.79％、乙醚－90.16％、甲苯－91.23％、正戊醇－95.91％、丙酮－96.45％、乙醇－90.83％。 优化培养等鞭金藻H29的试验中，确定了等鞭金藻H29最适生长温度为24℃，最适生长光照强度为4500 lux。考察f/2培养基中的各个主要成分，最后得到结果为：等鞭金藻培养基中以NaNO<,3>为最佳N源； FeC<,6>H<,5>O<,7>·5H<,2>O为最佳Fe源；KH<,2>PO<,4>为最佳P源。 以等鞭金藻H29的丙酮萃取相为研究对象。采用薄层层析和柱层析等方法分离纯化等鞭金藻H29的丙酮萃取相，利用细胞毒活性模型和酪氨酸激酶抑制剂筛选模型进行活性跟踪，得到两个活性组分1和2。经过显色反应和紫外扫描定性实验，又经过薄层色谱及高效液相色谱进行纯度测定，确定活性组分具有较高纯度，可能为醌类物质。 本实验首次发现等鞭金藻H29含有抗肿瘤活性物质，对该物质的深入研究和开发，极有可能发现新型的抗肿瘤先导化合物。

目录

文摘

第一章前言

第二章材料与方法

2.1微藻的培养

2.2抗种瘤活性藻株的筛选

2.2.1藻微藻粉的制备

2.2.2有机相待测样品制备

2.2.3水相待测样品制备

2.2.4肿瘤细胞的培养

2.2.5噻哗蓝(MTT)比色法检测细胞活力

2.3等鞭金藻H29的优化培养

2.3.1培养基

2.3.2培养条件的优化

2.3.2培养基成分的优化

2.3.4分析方法

2.4活性物质的分离纯化

2.4.1活性物质的提取

2.4.2活性物质的分离

2.4.3活性物质的定性及纯度测定

2.5仪器设备

第三章结果与讨论

3.1微藻培养

3.1.1海洋微藻的培养

3.1.2淡水微藻的培养

3.2具有抗肿瘤作用的微藻藻种的初步筛选

3.2.1细胞破碎的研究

3.2.2微藻水溶性提取物抗肿瘤作用

3.2.3微藻脂溶性提取物抗肿瘤作用

3.3等鞭金藻H29的优化培养

3.3.1培养条件的优化

3.3.2培养基成分的优化

3.3.3等鞭金藻H29优化的结果

3.4等鞭金藻H29丙酮萃取物的分离纯化

3.4.1活性物质的色谱分离条件

3.4.2活性物质的鉴定

第四章结论

参考文献

论文发表情况以及学位论文使用授权声明

致谢