养殖花鲈皮肤溃疡病抗性及敏感性群体的RAPD分析

摘要

鲈鱼（Lateolabrax japonicus）是海水网箱养殖鱼类的主要品种之一。但随着集约化养殖的发展，鲈鱼病害逐年增多。特别是近几年来发生的一种由哈氏细菌（Vibrio harveyi）引起的传染性皮肤溃疡病，因其流行范围广、危害严重，给花鲈养殖业造成了巨大的经济损失。本文通过RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）技术，探讨了象山港养殖花鲈群体的基因组DNA多态性，同时比较了皮肤溃疡病抗性群体（简称为抗性群体）和皮肤溃疡病敏感群体（简称为敏感群体）两个群体的遗传变异度，对象山港养殖花鲈群体的自身抗性能力做初步的研究。 总结出花鲈基因组DNA的快速提取方法：在65℃水中消化2h左右，再加RNA酶37℃消化30min，经酚、氯仿、异戊醇抽提，无水乙醇沉淀，最后溶于TE。所提的DNA A260/A280在1.75-1.90之间。 象山港养殖花鲈的RAPD-PCR扩增的适宜条件：25ul反应体系中，模板DNA 50ng，引物50ng，dNTPs 0.1mmol，10×Buffer 2.5ul， Mg2+ 2.0mmol， Taq+DNA聚合酶1.0U。扩增体系参数：94℃预变性5min；94℃变性1min，38℃退火1min，72℃延伸2.5min，35个循环；72℃延伸10min。 使用100条随机引物对47尾象山港养殖花鲈进行了RAPD扩增，其中有25条引物扩增出具有多态性条带。25条引物共检测出165个位点，其中多态位点为80个，多态比率达48.48﹪。平均每条引物扩增出6.6个位点。象山港养殖花鲈群体的遗传相似度为0.8815，遗传变异度为0.1185。Shannon多样性指数为19.5992，多样值为0.1160。这说明目前象山港养殖花鲈的遗传多样性比较高。 使用了经筛选具有多态性的25条随机引物检测了象山港养殖花鲈抗皮肤溃疡病群体和患皮肤溃疡病群体的基因组DNA多态性。实验结果发现，抗性群体的多态位点比率为44.24﹪，遗传相似度为0.8763，遗传变异度为0.1237，Shannon多样性指数为19.4248，多样值为0.1149。而敏感群体相应指数分别为40.37﹪、0.8831、0.1169、18.7905和0.1119。T检验显示两个群体的遗传多样性无显著性差异。