实时荧光定量PCR技术分析CGMP对小鼠肠道双歧杆菌种属结构的影响

摘要

双歧杆菌是哺乳动物肠道中一类重要的原籍菌群，具有多种生理功能：营养功能，调节肠道微生物的组成，抑制有害菌群的生长，对肠道的免疫调节作用，还具有防便秘、保护肝脏及抗衰老等功能。由于其众多生理功效，人们给予了双歧杆菌更多的关注。
　　本研究选择健康的BALB/c雄性小鼠作为实验动物，将其分为5个组：安慰组（每天早上灌胃0.2mL的生理盐水）、CGMP低中高3个剂量组（每天早上分别灌胃0.2mL不同浓度的CGMP）、对照组（既不灌胃生理盐水，也不灌胃CGMP，正常饮食），灌胃周期为2周。分别在灌胃的第0、3、5、7、9、11、13、15、21天取各组小鼠的新鲜粪便，进行DNA的提取。在g-Bifid-F/g-Bifid-R、Bif164-f/Bif662r、lm26/Lm3r、B350-1/B350-2、B230-1/B230-2共5对引物中，选择一对作为检测小鼠肠道双歧杆菌的合适引物。用实时荧光定量PCR技术结合选择的引物对各组小鼠肠道内的双歧杆菌属进行定性定量检测，并用普通PCR结合选择的9对引物对小鼠肠道中双歧杆菌各种进行检测。研究表明：①大量参考文献，并经过实验分析，最终确定lm26/Lm3r作为检测小鼠肠道双歧杆菌属的引物；②低剂量组与高剂量组的CGMP对小鼠肠道中的双歧杆菌没有明显的作用，且与安慰组和日食组相比不存在显著差异（P＞0.05）；而中剂量组的CGMP对小鼠肠道中的双歧杆菌具有促进作用，且在灌胃的第11天双歧杆菌的数量达到最大值，与安慰组和日食组相比存在显著性差异（P＜0.05）；③9对双歧杆菌种引物中，只有两歧双歧杆菌出现了特异性片段，其他8种均未出现阳性信号。

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第一章 前 言

1.1 引言

1.2 双歧杆菌简介

1.3 肠道中双歧杆菌的检测方法研究现状

1.4 生物活性肽的研究进展

1.5 酪蛋白糖巨肽的研究进展

1.6 选题依据

1.7 选题意义

第二章 试验材料与方法

2.1 小鼠肠道菌群基因组DNA的提取

2.2 双歧杆菌属引物的选择

2.3 用普通PCR及荧光定量PCR的方法检测CGMP对小鼠肠道双歧杆菌属的影响

2.4 用普通PCR的方法检测小鼠肠道双歧杆菌各种

第三章 结果与分析

3.1 小鼠粪便微生物基因组DNA的提取与检测

3.2 双歧杆菌属引物的选择结果

3.3 普通PCR及实时荧光定量PCR分析CGMP对小鼠肠道双歧杆菌属影响的结果

3.4 用普通PCR的方法检测小鼠肠道双歧杆菌各种

第四章 结论

4.1 研究结论

4.2 实验中还需进一步解决的问题

4.3 研究展望

参考文献

发表论文、参加科研情况说明

致谢