农杆菌介导犁苞滨藜NHX基因转化苜蓿影响因素的研究

摘要

本试验以子叶为外植体研究了2个苜蓿品种(新牧1号杂花苜蓿、新疆大叶紫花苜蓿)的组织培养程序，建立了苜蓿子叶植株再生体系。利用农杆菌介导法，将耐盐基因犁苞滨藜NHX转入苜蓿中，初步优化了农杆菌转化的方法。研究结果如下： (1)苜蓿子叶高效再生体系的建立①诱导培养基：MS+2，4-D 2mg/L+KT 0.5mg/L，新牧1号杂花苜蓿的出愈率为98.3﹪，新疆大叶紫花苜蓿的出愈率为97.5﹪；②分化培养基：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L;新牧1号杂花苜蓿的绿芽分化率为38.4﹪，成苗率为19.3﹪；新疆大叶紫花苜蓿的绿芽分化率为43.3﹪，成苗率为22.5﹪；③生根培养基：1/2MS，新牧1号杂花苜蓿的生根率为45.7﹪，移栽成活率为78.3﹪，新疆大叶紫花苜蓿的生根率为62.6﹪，移栽成活率为74.2﹪。 (2)农杆菌介导犁苞滨藜NHX的苜蓿遗传转化体系在愈伤组织诱导阶段加入卡那霉素对愈伤组织的再生有抑制作用，延迟15天进行抗性愈伤组织的筛选，可提高转化效率。本文以浸染后外植体的抗性愈伤组织率和抗性体胚形成率为指标建立了转化体系：子叶为转化受体的菌液浓度为OD<,600>=0.4～0.5，浸染时间为10～15min，预培养3d，共培养4d，AS浓度为20～30mg/L；使用200mg/L的羧苄青霉素脱菌，在Kan 50mg/L下筛选得到具有卡那抗性的子叶愈伤组织系，在Kan 10mg/L下筛选出抗性芽；对所获得的抗性芽进行PCR检测，结果表明犁苞滨藜NHX基因整合到了苜蓿基因组中。

目录

文摘

英文文摘

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引言

第一部分文献综述

1植物耐盐的生理生化机制与植物耐盐基因工程

1.1盐胁迫对植物的伤害

1.2植物的盐胁迫适应机制

2 Na+/H+逆向转运蛋白的研究进展

2.1 Na+/H+逆向转运蛋白基因的发现

2.2Na+/H+逆向转运蛋白的分子结构

2.3 Na+/H+逆向转运蛋白基因与耐盐性的关系

3遗传转化方法及应用

3.1农杆菌介导法

3.2基因枪转化法

3.3电击法

4苜蓿遗传转化的研究进展

4.1转苜蓿品质改良基因的研究

4.2转抗逆基因苜蓿的研究

4.3转抗病毒基因苜蓿的研究

4.4转抗虫基因苜蓿的研究

4.5转抗除草剂基因苜蓿的研究

4.6转基因苜蓿生产可食疫苗的研究

第二部分试验及结果

第一章苜蓿高效再生体系建立的研究

1材料和方法

2结果与分析

3结论

4讨论

第二章农杆菌介导犁苞滨藜NHX基因转化体系的建立

1材料和方法

2结果与分析

3结论

4讨论

参考文献

附录1

附录2

致谢

作者简介