胰淀素对人肝细胞L-02葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的影响

摘要

目的： 葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase，G-6-Pase)是糖代谢过程中一个重要的酶，由于它是糖异生和糖原分解的最后一步反应的限速酶，因此其基因表达水平的变化可影响到内生性糖的输出。事实上，2型糖尿病的高血糖同肝脏胰岛素抵抗所致肝糖过度输出有关。胰淀素作为胰岛β细胞重要的活性激素，参与血糖调节。目前研究表明，其异常分泌参与了胰岛素抵抗。本实验旨在研究胰淀素对该酶基因表达的影响，从而进一步探讨胰淀素与肝糖输出及与胰岛素抵抗的相关性。 方法： 1.引进人肝细胞系L-02，参照文献进行体外培养。 2.在不同浓度的血糖、胰岛素及不同浓度胰淀素的培养基下培养肝细胞，然后提取细胞总RNA，应用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法，检测G-6-Pase的表达水平。 结果： 1.经相差显微镜观察人肝细胞生长良好。 2.人肝细胞在高糖(15mM)高胰岛素(100IU/L)培养液中培养24小时后，G-6-PasemRNA丰度比对照组(低糖低胰岛素组)增高，具有统计学意义。 3.加入不同浓度的胰淀素与高糖高胰岛素联合培养2小时后，0.1μM、1μM胰淀素组G-6-PasemRNA水平无明显变化，10μM胰淀素会使G-6-PasemRNA丰度较高糖高胰岛素组明显增高，具有统计学意义。 结论： 1.人肝细胞L-02体外培养良好。 2.在高糖高胰岛素的培养基培养24小时后，与对照组(低糖低胰岛素组)相比，G-6-Pase的表达水平增高，提示了高浓度葡萄糖降低了胰岛素对G-6-PasemRNA的抑制作用；加入不同浓度的胰淀素后，与高糖高胰岛素组相比，0.1μM、1gM胰淀素组G-6-PasemRNA水平无明显变化；10μM的胰淀素会使G-6-PasemRNA的表达水平明显增高，(P<0.01)，显示高浓度胰淀素、高浓度葡萄糖条件使胰岛素对G-6-PasemRNA的抑制作用进一步降低。提示糖尿病患者异常分泌的胰淀素干扰了肝糖输出，参与了胰岛素抵抗。

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综述 胰岛素抵抗的研究进展

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