表面分子印迹技术在蛋白质识别分离中的应用

摘要

分子印迹技术是以分子识别理论为基础，制备对特定分子具有选择性功能的高分子聚合物的一种技术。以小分子为模板分子的分子印迹技术已经发展了几十年并取得了一定的成果。但是，将分子印迹技术应用于大分子如蛋白质印迹的研究存在一定的困难，进展相对缓慢，技术尚不成熟，仍需要改进常规的制备和分析方法来适应生物模板的物理性质(模板蛋白分子体积庞大，结构复杂、构象灵活性、水溶性)。
　　 本论文分别以硅胶(形貌不规则)、硅球为载体，采用表面印迹技术合成了蛋白质分子印迹聚合物，考察了其吸附性质与分子识别特性，并将识别性能良好的聚合物填装色谱柱用高效液相色谱进行表征。具体来讲，本论文的工作包括以下三个方面：
　　 一、综述了分子印迹技术的基本理论与蛋白质分子印迹的研究现状及发展前景。
　　 二、以硅胶为载体，在其表面修饰一系列功能基团，将模板牛血红蛋白以共价键的方式固定在载体表面，然后加入功能单体、交联剂等引发聚合合成表面分子印迹聚合物。通过吸附实验考察了印迹聚合物的吸附性能与识别性质。实验结果表明，印迹聚合物对模板分子有良好识别性能。
　　 三、采用表面印迹法，将模板溶菌酶固定在硅球的表面，制备了溶菌酶分子印迹聚合物。通过扫描电镜和元素分析考察聚合前后载体表面形态的变化，证实了载体表面成功修饰了分子印迹聚合物。研究了聚合物的吸附性能并将聚合物填装色谱柱用高效液相色谱进行表征。结果表明，分子印迹聚合物可以选择性地识别模板蛋白。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 绪论

第一节 分子印迹技术的基础知识

1.1.1 分子印迹技术的概述

1.1.2 分子印迹技术的基本原理

1.1.3 分子印迹技术的分类

1.1.4 分子印迹聚合物制备方法

第二节 蛋白质分子印迹技术

1.2.1 蛋白质的基本性质

1.2.2 蛋白质分子印迹概述

1.2.3 蛋白质分子印迹研究意义

1.2.4 蛋白质分子印迹存在的困难

1.2.5 蛋白质分子印迹聚合物的制备

第三节 蛋白质分子印迹技术存在的问题与展望

1.3.1 蛋白质分子印迹存在的问题

1.3.2 分子印迹技术自身的特点

1.3.3 蛋白质分子印迹技术的展望

第四节 蛋白质分子印迹技术的应用

第五节 本论文的研究的内容及意义

参考文献

第二章 以丙烯酰基β-环糊精和丙烯酰胺为功能单体的蛋白质印迹聚合物的初步研究

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1 仪器

2.2.2 试剂

2.2.3 印迹与非印迹聚合物的制备

2.2.4 吸附动力学实验

2.2.5 等温吸附实验

2.2.7 特异性吸附实验

2.2.8 竞争吸附实验

2.3 结果与讨论

2.3.1 聚合物的表征

2.3.2 聚合物的吸附动力学实验

2.3.3 吸附等温线

2.3.4 特异性吸附实验

2.3.5 竞争吸附实验

2.4 结论

参考文献

第三章 基于丙烯酰基β-环糊精和丙烯酰胺为功能单体的表面印迹聚合物在水相中识别溶菌酶

3.1 引言

3.2 实验部分

3.2.1 试剂

3.2.2 合成丙烯酰基β-CD

3.2.3 在硅球表面引入乙烯基和氨基功能基团

3.2.4在硅球表面引入醛基

3.2.5制备印迹和非印迹聚合物

3.2.6 仪器表征

3.2.7 吸附实验

3.2.8 色谱实验

3.3 结果与讨论

3.3.1 聚合物的表征

3.3.2 吸附动力学实验

3.3.3 等温吸附实验

3.3.4 特异性吸附实验

3.3.5 色谱实验

3.4 结论

参考文献

在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢