菟丝子总多糖对体外培养骨髓间充质干细胞的分化及皮肤修复的相关性研究

摘要

目的观察菟丝子总多糖对体外培养骨髓间充质干细胞分化和对缺损皮肤区干细胞修复的影响，探索菟丝子总多糖在体内和体外作用的差异性及肺与肾的相关性。方法细胞实验：取SD大鼠胫骨和股骨的骨髓进行体外培养并纯化，分别加入菟丝子总多糖、二甲基亚砜(DMSO)。然后于倒置显微镜下观察并进行逆转录聚合酶链反应技术和免疫细胞化学染色技术检测。 皮肤缺损实验：将SD大鼠肩胛间区切取1.5×1.5cm<'2>皮肤，分别使用菟丝子总多糖干粉、凡士林纱条、生理盐水纱布处理创面。大体观察缺损皮肤的修复生长，于4、8周末分别处死一批大鼠，取损伤部位皮肤行组织病理学检测，光镜下阅片。结果经菟丝子总多糖诱导的骨髓间充质干细胞形态发生改变，部分细胞长出轴突。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结果示：3组样本均有神经元烯醇化酶(NSE)的mRNA表达，菟丝子总多糖样本的NSE表达明显高于空白样本，而DMSO样本的NSE表达明显高于菟丝子总多糖样本。3样本均有胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达，菟丝子总多糖样本的GFAP的mRNA表达量超过空白样本，DMSO样本的GFAP的mRNA表达量低于空白样本。细胞爬片的免疫细胞化学检测结果示：菟丝子总多糖样本、DMSO样本和空白样本分别有27.45％、41.5％、8％的细胞染色显示为NSE，分别有11.7％、4.323％、5.9％的细胞染色显示为GFAP。 大体观察缺损皮肤的修复生长，见菟丝子组瘢痕小于其余两组，8周后菟丝子组部分标本可见稀疏毛发生长；组织病理学检测见菟丝子总多糖组4周时毛囊和皮下血管的修复与其余两组有明显差异，8周后皮肤附属器(毛囊及汗腺)、皮下毛细血管的修复与其余2组有显著性差异；纤维组织增生、炎性细胞浸润，在4和8周，3组间均无差异。 结论菟丝子总多糖在体外细胞培养试验中对骨髓间充质干细胞有明显地向神经元细胞诱导分化的作用，同时促进了向神经胶质细胞的转化。菟丝子总多糖在体实验中可促进毛囊和皮脂腺生长，创面毛细血管增生，使胶原排列有序，生长更成熟、粗大、接近正常组织，但菟丝子总多糖未在皮下诱导分化出神经元细胞或促进神经纤维爬行生长。表明菟丝子总多糖能够促进成体干细胞分化；而决定成体干细胞分 化方向的因素中环境因素大于菟丝子总多糖的诱导作用；通过补肾药菟丝子对骨髓多能干细胞向神经元细胞的转化成功，证明了“肾主骨生髓”的传统理论；通过菟丝子对皮肤及骨与髓的实验证明肺与肾相关联的传统理论的正确性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：常用中英文缩略语表

1.引言

2.菟丝子总多糖诱导骨髓间充质干细胞向神经元细胞定向分化的研究

3.菟丝子总多糖对皮肤缺损区干细胞的修复影响实验

4.讨论

致谢

参考文献

附图

附：综述骨髓间充质干细胞纯化及诱导分化为神经细胞的研究进展

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