小肠移植感染与抗微生物肽表达的相关研究

摘要

目的:(1)研讨大鼠小肠移植缺血再灌注术后内毒素血症与炎症因子的表达。(2)探讨小肠移植缺血再灌注术后抗菌肽的表达及意义。(3)探讨不同免疫抑制药物(他克莫司、环孢霉素、雷帕霉素和雷公藤)对人肠系细胞(HT29和Caco一2)β一防御素表达的影响及机制。(4)探讨器官簇移植的感染特点和处理经验。 方法：(1)Wister大鼠小肠移植到SD大鼠，在缺血再灌注后Oh、2h、6h、12h和24h后手术开腹取回肠、结肠、肠系膜淋巴结、脾脏和肺组织，同时从下腔静脉取全血。用鲎试剂盒检测血中内毒素(LPS)，酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组化方法检测细胞因子，光镜下对移植粘膜进行病理检查。(2)通过实时定量PCR、原位杂交和免疫组化等方法进行抗微生物肽(防御素和溶菌酶)的检测。(3)人肠系细胞在含有／不含有FK5O6、CsA、Rapa和雷公藤的细胞培养液中培养后，加入白细胞介素一1α(IL一1β )再共培养3h，实时定量PCR检测人β一防御素(HBD一1和HBD一2)mRNA拷贝数，免疫印迹法(western blot)检测细胞上清中的HBD一2浓度，电泳迁移率实验法(EMSA)和ELISA法检测核转录因子kβ(NF—kβ)信号途径。(4)对两例带小肠器官簇移植受体术后病原体感染和处理的情况作一回顾性的分析。 结果：(1)小肠移植外周血内毒素在缺血再灌注后6h达到最高峰，白细胞介素-2(IL-2)在缺血再灌注后2h达到高峰，干扰素-γ(IN-γ)在缺血再灌注后6h达到高峰，肿瘤坏死因子α(TNF-α)在缺血再灌注后12h达到高峰，白细胞介素-4(IL-4)在缺血再灌注后24h达到高峰。白细胞介素-1 β(IL-1β)没有变化。肠系膜淋巴结和脾脏粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在试验组表达明显增强。移植小肠出现肠粘膜损害。(2)小肠缺血再灌注后回肠大鼠防御素-5(RD-5)mRNA、肾大鼠β-防御素-1(RBD-1)的转录下调，肺、结肠大鼠β-防御素-2(RBD-2)转录上调。小肠溶菌酶表达增加。(3)FK506、CsA、Rapa促进人肠系细胞HBD-2在IL-1 β诱导下的表达，雷公藤多甙抑制HBD一2的表达。(4)两例带小肠器官簇移植受体术后发生严重感染，一例术后103d死于巨细胞病毒感染，另一例术后52d死于严重的细菌感染。 结论：小肠移植缺血再灌注后早期即发生了内毒素血症和炎症反应。小肠缺血再灌注术后防御素与溶菌酶的表达与内毒素血症有关。不同免疫抑制药物对人肠系细胞HBD-2表达的影响不同，上述作用部分与NF-k β信号途径有关。带小肠器官簇移植术后常并发严重的细菌和病毒感染。免疫抑制剂的优化是提高术后抗感染能力的关键之一。

目录

文摘

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绪论

第一部分小肠移植缺血再灌注术后内毒素血症与炎症因子的表达及意义

第二部分小肠移植缺血再灌注术后抗菌肽的表达及意义

第三部分免疫抑制药物对Caco-2和HT-29细胞防御素表达的影响及机制

第四部分带小肠器官簇移植术后病原体感染的临床分析

结论

参考文献

致谢

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