不明原因自然流产与NK细胞活化性受体的相关性研究

摘要

目的：探讨不明原因自然流产与外周血和蜕膜NK细胞表面活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D表达的相关性。 材料与方法：选取9例连续三次或三次以上早孕不明原因复发性流产患者为URSA组，21例1-2次不明原因自然流产患者为非复发性自然流产组，以25例正常早孕人流妇女为对照组，采集三组的外周血和蜕膜组织，Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞，MACS磁珠分选CD3<’->CD56<’+>NK细胞后，用流式细胞技术检测三组的外周血和蜕膜中不同NK亚群上活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D的表达有无差异。 结果：(1)外周血CD56<,dim>CDl6<’+>NK上表达活化性受体NKp46、NKp30和NKG2D，且三组的表达无显著差异(P>0.05)；(2)早孕蜕膜NK细胞表达NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D。不明原因非复发性自然流产组的蜕膜CD56<’bright>CDl6<’->NK细胞上NKp44的表达(P=0.021)和CD56<’dim>CDl6<’+>NK细胞上NKp46(P=0.026)、NKp44(P=0.041)的表达较正常早孕组显著升高；但URSA组与正常早孕组及非复发性自然流产组相比，各活化性受体的表达差别无显著性(P>0.05)。 结论：不明原因自然流产与蜕膜局部NK细胞表面活化性受体NKp46和NKp44的表达增多有关，与外周血中的NK细胞活化性受体表达无关。 目的：探讨不明原因自然流产患者蜕膜NK细胞杀伤活性与其表面活化性受体NKp46、NKp44表达的相关性。 材料与方法：研究对象同第一部分，用细胞染色及流式细胞技术对上述三组的蜕膜NK细胞杀伤K562细胞的活性进行测定，并与蜕膜NK细胞上活化性受体的表达进行相关性分析。 结果：(1)不明原因非复发性自然流产患者的蜕膜NK细胞杀伤活性较正常早孕妇女显著升高(P=0.014)；但URSA患者与正常早孕妇女及非复发性自然流产患者相比，蜕膜NK细胞的杀伤活性差别无显著性(P>O.05)；(2)蜕膜NK细胞的杀伤活性与蜕膜CD56<'bright>CDl6NK细胞上NKp44的表达和蜕膜CD56<'dim>CDl6<'+>NK细胞上NKp46的表达均呈显著正相关(r=0.677和r=O.634，P均<0.05)。 结论：活化性受体NKp46、NKp44的表达增多导致蜕膜NK细胞杀伤活性增强可能在不明原因自然流产的发病中起重要作用。蜕膜CD56<'bright>CD6<'->NK和CD56<'dim>CDl6<'+>NK细胞可能共同参与了蜕膜NK细胞对靶细胞的杀伤。 目的：探讨活化性受体NKp46和NKp44对蜕膜NK细胞所起的作用。 材料和方法：采集正常早孕人流妇女的新鲜蜕膜组织，用MACS分离总CD3-CD56<'+>NK细胞，用流式细胞技术分离CD3<'->CD56<'bright>CD16NK细胞亚群。分别用适当浓度的NKp46(或NKp44)活化性和封闭性抗体在37℃5％CO2条件下孵育24小时后，观察它们的杀伤功能变化和蜕膜NK细胞分泌IFN-Y和TNF-a的变化。 结果：(1)NKp46和NKp44受体活化能显著增加蜕膜NK细胞和CD3<'->CD56,'bright>CDl6NK细胞亚群的杀伤功能，它们的作用能分别被其特异性封闭抗体所阻断；(2)NKp44受体活化可使蜕膜NK细胞分泌IFN-γ显著增加，但对其分泌TNF-α无明显影响，而NKp46受体活化对其分泌IFN-Y和TNF-α均无明显影响。 结论：蜕膜NK细胞的杀伤活性受NKp46和NKp44受体的调控，它们的活化或阻断分别启动或抑制了蜕膜NK细胞的杀伤活性。其中，CD3<'->CD56<'tnght>CDl6NK细胞亚群也起着一定的作用。NKp44受体活化后还可以通过上调蜕膜NK细胞分泌IFN-y来增强蜕膜NK细胞的杀伤功能。 因上调2倍或下降50％为筛选标准，胆固醇结石病人肝脏差异表达基因共73条。查阅差异基因的功能后发现，有7个基因与脂类代谢相关：载脂蛋白E(Apolipoprotein E，APOE)、胆固醇酯转运蛋白(Cholesteryl Ester Transfer Protein，CETP)、脂蛋白脂酶(1ipoprotein lipase，LPL)、羧基肽酶E(carboxyl peptidase E，CPE)、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein4，FABP4)、核受体NR4A1(nuclear receptor subfamily4，groupA，member1)和7-脱氢胆固醇还原酶。用实时定量PCR对12例胆囊胆固醇结石病人(含芯片胆石组6例)和8例对照者(含芯片对照组2例)检测上述7个基因的表达。芯片胆石组与芯片对照组的验证结果与芯片筛选一致；12例胆固醇结石病人与8例对照的验证结果显示，7个基因中有5个基因的表达变化与芯片筛选一致：CETP表达上调，胆石组10.66±1.50 VS对照组5.39±109，P<0.05；LPL表达下降，胆石组12.23±3.85 vs对照组47.28±13.66，P<0.05；APOE表达下降，胆石组36.33+2.81 vs对照组71.15±14.26，P<0.05；CPE表达下降，胆石组8.12±1.10 VS对照组30.97±12.21，P<0.05；FABP4表达下降，胆石组32.25±4.18 vs对照组120.71±34.80，P<0.05。芯片检测和验证结果不但显示基因芯片筛选研究的有效性，同时提示肝脏CETP、LPL、APOE、CPE和FABP4基因表达异常可能与胆囊胆固醇结石形成有关。 鉴于核受体对脂类代谢的调控作用以及国内外对核受体研究的关注，第二部分用实时定量PCR方法研究肝脏核受体基因的表达，它们是：肝脏X受体LXRα(Liver X Receptor α)、法尼醇受体(Farnesoid Xreceptor，FXR)、固醇类异生物受体(steroid xenobiotic receptor，SXR)、肝受体同类物-1(1iver receptor homolog一1，LRH-1)，并研究核受体调控

目录

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前言

第一部分 原因不明自然流产患者外周血与蜕膜NK细胞表面活化性受体的表达

第二部分 不明原因自然流产患者蜕膜NK细胞杀伤功能与活化性受体表达的相关性分析

第三部分 蜕膜NK细胞表面活化性受体的功能研究

第四部分 蜕膜NK细胞活化性受体表达的影响因素研究

全文总结

参考文献

致谢

综述：人类自然杀伤细胞的抑制性受体和活化性受体研究进展

博士期间已发表文章