团头鲂（♀）×翘嘴鲌（♂）杂交后代的遗传特征及长江草鱼的EST-SSR、雌核发育研究

摘要

鱼类远缘杂交是指在不同种间、属间甚至亲缘关系更远的鱼类之间的杂交。不同种、属间鱼类的性状可以通过远缘杂交的手段结合到一起。跨越种属之间的界限，加大遗传变异力度，从而创造出更符合人类需要的新类型或新物种。远缘杂交已发展成为鱼类育种的重要手段之一。
　　本研究利用团头鲂(Megalobrama amblycephala)“浦江1号”(♀)×翘嘴鲌(Erythroculter ilishaeformis)(♂)进行属间人工杂交，获得了遗传背景不同的杂交子代。结果表明，团头鲂“浦江1号”(♀)×翘嘴鲌(♂)具有很高的受精率和孵化率，分别达到了90.0％和80.6%。鲂鲌杂交子代的体型为二种，其中，96.2%的后代为介于鲂鲌中间型个体(杂种A型)，另外还存在3.8%的后代(杂种B型)与母本团头鲂“浦江1号”相近。经Partec流式细胞仪测定得出，鲂鲌杂种A型和B型个体DNA含量与母本、父本基本相同，表明其为二倍体。通过染色体计数发现杂交A型和B型个体的染色体核型与父母本一致均为2n=48条染色体。2个特异性微卫星位点（TTF6和TTF10）分析显示，杂种A型个体从其父母本中各获得了一套遗传物质，证实其为二倍体杂交种，鲂鲌杂种B型的带型则与母本完全一致，为雌核发育后代。土池同池生长性能分析显示鲂鲌中间型个体的生长速度显著快于团头鲂“浦江1号”和翘嘴鲌，具有显著的超亲生长优势。本研究为鳊鲌杂交新品系的建立奠定了一定的基础，另外，鲂鲌杂交自发产生雌核发育后代便于团头鲂纯系的构建。
　　本研究还对我国不同地域草鱼(Ctenopharyngodon idella)群体进行了鉴定和遗传多样性分析，在2400条草鱼EST序列中，对其二碱基至五碱基重复序列进行筛选，共筛选出微卫星位点181个，选取其中的46个进行引物的设计与合成，共获得9对微卫星引物呈较高多态性。利用这9对引物对8个长江水系草鱼群体和1个红色草鱼自然突变群体进行了遗传结构分析。结果显示，长沙草鱼、安庆草鱼、嘉兴草鱼、靖江草鱼、石首草鱼、松江草鱼、瑞昌草鱼、邗江草鱼、红色突变草鱼9个群体的平均等位基因数（Na）分别为4.67、5.22、5.33、5.00、4.89、4.78、4.89、4.67、2.56，平均期望杂合度(He)分别为0.6397、0.6543、0.6831、06356、0.6737、0.6483、0.6664、0.7129、0.4696，平均多态信息含量（PIC）分别为0.5787、0.6126、0.6283、0.5894、0.6217、0.5956、0.6136、0.6582、0.3949，表明邗江草鱼的遗传多样性最高，而红草鱼具有最低的遗传多样性。聚类分析表明，8个长江水系草鱼群体首先聚类，最后与红色草鱼聚类；其中，安庆草鱼与松江草鱼首先聚为一支，遗传距离较近，为0.0725；红色草鱼与长沙草鱼的遗传距离最远，为0.5217。研究结果对我国长江水系草鱼种质资源保存、种群鉴定和良种选育具有重要意义。
　　本研究为了获得雌核发育草鱼，利用紫外线灭活20min的团头鲂精子，与草鱼卵子授精2min后，立刻于4-6℃冷休克处理12min，实验成功获得了雌核发育草鱼，其受精率、孵化率和出苗率分别为70.78%、21.51%、4.58%。对其形态学特征进行了检测，雌核发育草鱼与正常草鱼极为相似。由于草鱼和团头鲂在生物学分类上属于不同的亚科，所以可以仅通过其形态特征就能将雌核发育草鱼从杂种个体中鉴别出来。对雌核发育草鱼群体的微卫星分析表明，其等位基因数减少，遗传纯度大大提高。

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引言

一、鱼类远缘杂交研究

二、草鱼的EST-SSR标记研究

三、草鱼雌核发育研究

四、本研究的目的和意义

第一章 团头鲂(♀)×翘嘴鲌(♂)杂交后代的遗传特征研究

1.1 材料

1.2 方法

1.3 结果

1.4 讨论

第二章 长江草鱼群体EST-SSR标记的筛选及其遗传结构研究

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

第三章 草鱼雌核发育研究

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

总结与展望

参考文献

致谢

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