胃癌中肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化及TGFβ/Smad信号传导系统表达的初步研究

摘要

第一部分实验目的：胃癌在世界范围内是发病率、死亡率最高的恶性肿瘤之一。目前胃癌发生机制的研究主要集中于分子和细胞生物学水平，包括抑癌基因在内的相关基因的失活在胃癌的发生、发展过程中发挥重要作用。基因的失活方式有很多，其中，启动子CpG岛的异常甲基化受到越来越多的重视。最近的研究证实启动子CpG岛甲基化可能在胃癌发生、发展过程中都发挥重要作用，并且是导致抑癌基因失活的重要机制。本实验通过检测10个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化在94例胃癌癌组织和癌旁组织中的发生率，探讨上述基因的甲基化与性别、年龄、肿瘤位置、淋巴结转移、细胞分化程度及PTNM临床分期的关系，建立胃癌较为完整的相关基因甲基化谱，为临床早期诊断胃癌提供理论依据。 实验方法：应用酚／氯仿法按常规抽提组织的基因组DNA，经过亚硫酸盐处理，应用甲基化特异的PCR(methylation-specificPCR，MSP)方法检测94例胃癌癌组织、癌旁组织胃粘膜10个基因的甲基化发生率。将部分PCR产物回收，应用腺病毒载体构建重组体导入大肠杆菌中，培养后挑选克隆测序，同时测定甲基转移酶(SssImethylase)处理癌旁正常组织DNA后甲基化状态。 实验结果：我们共检测了E-cad、DAPK、APC、p16INK4a、RASSFla、hMLHl、TGFBRI、TGFBRII、COX-2和MGMT等10个基因的甲基化发生情况，我们发现E-cad、APC和RASSFla这三个基因在胃癌组织中发生了甲基化而在癌旁正常组织中无甲基化发生，分别是E-cad为3496(32／94)，APC为2396(22／94)，RASSFla为57％(54／94)。DAPK、hMLHl、TGFBRII和p16INK4a这4个基因胃癌组织甲基化率高于相应癌旁组织，分别是DAPK为59％(55／94)和3％(3／94)，hMLHl为28％(26／94)和5％(5／94)，TGFBRII为43％(41／94)和3％(3／94)，p16INK4a为45％(42／94)和23％(22／94)，均达到统计学意义(p<0．01)。相反的是COX-2基因，胃癌组织和相应癌旁组织都有去甲基化和甲基化条带，胃癌组织甲基化率低于相应癌旁组织，并且差异达到统计学意义(p65岁分为两组，甲基化率分别是E-cad为35％(22／63)与32％(10／31)，DAPK为52％(33／63)与71％(22／31)，APC为27％(17／63)与16％(5／31)，p16INK4a为32％(20／63)与71％(22／31)，RASSFla为49％(31／63)与74％(23／31)，hMLHl为24％(15／63)与35％(11／31)，TGFβRI为14％(9／63)与7％(2／31)。TGFβRII为43％(27／63)与45％(14／31)，MGMT为19％(12／63)与10％(3／3D。其中p16INK4a和RASSFla的甲基化率>65岁组高于≤65岁组，p

目录

第一部分 肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化与胃癌相关性的研究

第二部分 TGF-β/Smad信号传导系统在胃癌中表达的初步研究

讨论

参考文献

综述一DNA甲基化与胃癌

综述二TGF-β/Smad信号传导途径和胃癌

致谢

附录：发表文章、参加会议