Survivin T34A突变基因对肺癌细胞体外凋亡作用及体内靶向治疗研究

摘要

第一部分目的：研究SurvivinThr34->Ala突变基因在体外对肺癌A549细胞株的凋亡作用的影响。 方法：分别构建带有野生型survivin基因的质粒(3．1a-Survivin-WT)和带有SurvivinThr34-->Ala突变基因的质粒(3．1a-SurvivinThr34->Ala)。分别用含有3．1a-Survivin-WT(WT)、3．1a-SurvivinThr34--)Ala(T34A)和3．1a空质粒的脂质体转染A549细胞株，培养72小时分别经流式细胞仪检测凋亡率。 结果：3．1a、3．1a-Survivin-WT、3．1a-SurvivinThr34->Ala转染A549肺癌细胞后72小时凋亡率分别为6士2．2％、14+3．9％、384-7．4％(p50．01)。 结论：3．1a-SurvivinThr34->Ala可增加体外A549细胞的凋亡，具有潜在对肺癌的靶向治疗作用。 第二部分目的：研究SurvivinThr34-->Ala突变基因在荷肺癌裸鼠体内对实体肿瘤的实验治疗作用。 方法：建立荷肺腺癌(A549)裸鼠动物模型。待接种肿瘤生长至直径5mm左右，选40只裸鼠进行实验。随机分成4组，每组10只。分别用含有3．1a空质粒、3．1a-Survivin-WT(WT)、3．1a-SurvivinThr34→Ala(T34A)的脂质体或化疗药物顺铂注射到肿瘤内。给药前当日及给药后l5天内每5天测定肿瘤大小，绘制肿瘤生长曲线，比较各组差别。15天后处死裸鼠，切下肿瘤标本进行常规病理切片检查、survivin免疫组化染色及凋亡TUNEL染色计算阳性细胞数，并比较各组差别。 结果：SurvivinT34A突变组和顺铂治疗组的肿瘤生长明显减缓，与对照组比较有统计学意义(p<0．05)。Survivin免疫组织化学染色，WT组survivin表达阳性细胞率与空质粒组之间差别有高度统计意义(p<0．001)，T34A组与空质粒组之间差别表达有高度统计意义(p=0．001)。TUNEL凋亡染色后，凋亡细胞计数，WT组与空质粒对照组之间差别表达无统计意义(p=0．445)，T34A组与空质粒组之间差别有统计意义(p：0．026)，顺铂组与空质粒对照组之间表达差别有统计意义(p=0．013)。 结论：SurvivinT34A在体内可明显抑制A549肺癌生长。以脂质体为载体转染survivinWT和SurvivinT34A在A549肿瘤中可明显表达。SurvivinT34A在体内可明显引起A549细胞凋亡，其作用不差于顺铂。

目录

第二部分SurvivinT34A突变基因体内靶向治疗实验研究

附录

英文索引

致谢

研究生简历

Survivin与肿瘤靶向治疗综述