Survivin突变基因对肺癌细胞的凋亡作用

摘要

目的 研究Survivin Thr<'34>→Ala突变基因对肺癌A549细胞株的凋亡作用;研究Survivin Thr<'34>→Ala突变基因对肺癌95C和95D细胞株的凋亡作用,为肺癌的基因治疗开拓新的道路.方法 从肺癌A549细胞株中,用RT-PCR提取Survivin基因,构建质粒,并对其进行定点突变,构建Survivin Thr<'34>→Ala突变基因,转染A549细胞株,培养24、48、72、96小时Hoechst凋亡染色,荧光显微镜观察测凋亡率;构建C-末端长α螺旋区突变的Survivin Mutant-alpha和BIR区突变的Survivin Mutant-BIR-1、Survivin Mutant-BIR-2突变基因,转染A549细胞株,Hoechst染色测凋亡率;肺癌95C、95D细胞株分别行Survivin免疫组化染色,并用Survivin Thr<'34>→Ala突变基因转染95C和95D细胞,48小时后Hoechst染色.结论 Survivin Thr<'34>→Ala突变基因对肺癌A549细胞株具有明显的诱导凋亡的作用;BIR序列区及C-末端长α螺旋的疏水区的结构完整对诱导凋亡作用的发挥十分重要;同时Survivin Thr<'34>→Ala对肺癌95C、95D细胞株同样具有诱导凋亡作用,且Survivin表达高的肺癌细胞比表达低的肺癌细胞效果好.

目录

前言

材料与方法

1.1细胞及细胞培养

1.2提取SurvivinCDNA

1.3质粒构建

1.4Survivin定点突变

1.5质粒抽提

1.6转染

1.7凋亡检测

1.8统计方法

结果

讨论

结论

附录

参考文献

致谢

Survivin在肿瘤中的表达及其在诊治中的作用

一分子结构、作用机理与变异体

二Survivin的表达

三诊断与预后

四治疗

五总结

参考文献

英文索引

论文独创性声明和论文使用授权声明