上皮性卵巢癌中微卫星不稳定性和错配修复基因表达的研究

摘要

目的：卵巢癌是死亡率最高的生殖系统肿瘤，其中90％为上皮性卵巢癌，其发生发展是一个多因素参与的多阶段、多步骤的演变过程。卵巢癌是成年妇女中最常见的具有遗传因素的肿瘤之一，也是HNPCC最常见的伴发肿瘤之一。本课题通过检测新鲜卵巢癌组织标本中的微卫星不稳定性及错配修复基因mRNA的表达，来了解卵巢癌中是否存在基因组不稳定性及错配修复基因的失活，并了解微卫星不稳定性与错配修复基因表达与卵巢癌的分期，分级，分型的关系。同时通过检测错配修复基因启动子区域的甲基化从DNA水平来探讨卵巢癌中错配修复基因失活的机制，有助于阐明卵巢癌的发生机制。 第一部分上皮性卵巢癌和微-p_星不稳定性 方法：收集2004年6月一2005年1月复旦大学附属肿瘤医院和附属妇产科医院的90例上皮性卵巢癌新鲜切除标本及同一患者的5ml术前外周静脉血作为判断微卫星不稳定性的正常对照，并同时收集20例同期手术的良性卵巢囊肿患者的卵巢病灶新鲜组织和5ml术前外周静脉血作为对照组；分别抽提病例组和对照组组织和外周血基因组DNA，选取国际合作HNPCC小组推荐的五个检测位点是：BAT25、BAT26、D2S123、D5S346、D17S250，进行毛细管凝胶电泳，分析软件自动分析得出结果，用SPSSll．0统计软件分析，PO．05)。 结论：微卫星不稳定性在上皮性卵巢癌中是一重要现象；在不同亚型的上皮性卵巢癌中的作用不同；多发生于疾病的早期，在上皮性卵巢癌的发病中起一定的作用，并推动疾病的恶变进程。 第二部分上皮性卵巢癌中错配修复基因表达和微--p_星不稳定性 方法：收集2004年6月一2005年1月复旦大学附属肿瘤医院和附属妇产科医院的90例上皮性卵巢癌新鲜切除标本并同时收集20例同期手术的良性卵巢囊肿患者的卵巢病灶新鲜组织做为对照，提取mRNA；用实时荧光定量PCR仪相对定量分析对照组和病例组中hMLHl、hMSH2、hMSH3、hMSH6、hPMSl、hPMS2的表达；结果用SPSSlL0统计软件分析，PO．05)。 2)：hMSH2的mRNA表达在良性囊肿和肿瘤组织没有显著性差异(P=O．987)：其表达与肿瘤的分期、分级、分型及微卫星状态没有显著性差异(P>O．05)。 3)：hMSH3、hMSH6、hPMSl、hPMS2的mRNA的表达在良性囊肿和肿瘤组织有显著性差异(PO．05)。 结论：人体错配修复系统中，hMLHl基因对DNA碱基错配修复具有重要的作用；错配修复基因表达的缺失尤其是hMLHl基因在上皮性卵巢癌的发生中起一定的作用；且促进疾病的恶性演进；并导致上皮性卵巢癌中的微卫星不稳定性。 第三部分上皮性卵巢癌中hMLH1基因表达缺失和启动子甲基化 方法：用甲基化特异PCR(MSP)的方法分析病例组和对照组中hMLHl基因启动子甲基化的状态，并分析病例组中hMLHl基因启动子甲基化的状态与肿瘤的临床病理特征和微卫星状态的关系。结果用SPSSll．0统计软件分析，PO．05)； 3)：hMLHl基因启动子区甲基化的发生与上皮性卵巢癌中微卫星不稳定性的发生及hMLHl基因的表达缺失显著相关(P

目录

前言

第一部分上皮性卵巢癌中微卫星不稳定

第二部分上皮性卵巢癌错配修复基因表达与微卫星不稳定性

第三部分上皮性卵巢癌中hMLH1基因表达缺失和启动子甲基化

全文小结

英文缩略词表

综述错配修复基因与卵巢肿瘤

研究生期间发表和待发表的论文和综述及协助导师成功申请的课题及获得的奖励

致谢

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