上海地区儿童急性下呼吸道感染的鼻病毒检测及临床研究

摘要

本研究的目的是建立套式逆转录聚合酶链反应(nestedreversetranscription-polymerasechainreaction．nestedRT-PCR)检测临床样本鼻病毒(humanrhinovims，HRV)基因的方法，并进一步对扩增产物进行序列分析；用套式RT-PCR及直接免疫荧光(directimmunofluorescenceassay,DFA)的方法对包括HRV在内的引起小儿急性下呼吸道感染(acutelowrespiratorytractinfection，ALRTI)的常见病毒病原进行检测，以了解上海地区ALRTI患儿病毒感染的现状。 对象及方法： 1．收集2005年1月到2005年12月住院确诊为共342例ALRTI患儿的深部鼻咽分泌物(nasopharyngealsecretion，NPS)标本。 2．用套式RT-PCR的方法检测NPS中的HRV基因，并进一步对扩增产物进行序列分析；用直接免疫荧光法(directimmunofluorescenceassay,DFA)的方法检测NPS中的呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvires，RSV)、流感病毒(influenzavirus，IFV)、副流感病毒(parainfluenzavirus，PIV)、腺病毒抗原(adenovirus，ADV)。 3．对各种病毒在小儿ALRTI中所占比例、性别、年龄、季节分布及临床特点进行分析。 结果： 1．用套式RT-PCR的方法在342例ALRTI患儿的NPS标本中，检测到46例HRV为阳性(13．45％)；选取15份HRV阳性样本用另一对引物扩增并测序，测得的核苷酸序列经过blast比较，与GeneBank中已知HRV序列的同源性在83％-97％之间；15份样本序列之间核苷酸同源性在64．4％到98．4％之间，核苷酸变异在1．6％到48．3％之间；15份样本序列在进化树中聚类为2簇；15份样本序列变异度较大，可表现为核苷酸的点突变，也可是临近几个碱基同时突变，甚至有单个或临近几个碱基的核苷酸缺失及插入突变。 2．男性223例患儿中检测出HRV阳性33例(14．7％)，女性¨9例患儿检出HRV阳性13例(10．9％)男女阳性数之比为2．5：1，但男女检出率无差异(X。=1，P>0．05)。HRV阳性患儿中，3岁以下婴幼儿检出例数有38例，占HRV总检出数的82．6％；1岁以下患儿检出27例占HRV总检出数的5客．7％。HRV致ALRTI全年可见，在3到5月为最高峰。 3．342例患儿中检出RSV阳性64例(18．70％)。男性223例患儿中检出RSV阳性46例(20．6％)，女性¨9例患儿中RSV阳性18例(15．1％)，男女阳性数之比为2．6：1，但男女检出率无差异(X2=2．41，P>0．05)。RSV阳性患儿中，1岁以下婴幼儿检出例数有46例，占RSV总检出数的71．8％。1岁以下患儿RSV的检出率(47．90％)与1岁以上患儿RSV的检出率(12．30％)比有显著差异(X2=4．03，P<0．05)。RSV的检出阳性率从2月份起逐渐下降至6到7月份达到最低；8月份起检出率逐渐升高，到12月份达到最高。 4．342例ALRTI患儿中检出ADV感染9例(2．63％)；342例中检出PIV感染8例(23％)，其中l型PIV7例，2型PIV1例；342例中检出IFV感染7例(2．0％)，其中A型IFV5例，B型IFV2例。 5．本组患儿病毒混合感染共有4例：RSV合并HRV感染1例，RSV合并ADV感染1例，RSV合并l型PIV感染1例，HRV合并A型IFV1例。 6．342例患儿总共检出病毒阳性的病例130例，总检出率为38％。男女感染数之比为2．8：1。男性感染率(43％)比女性感染率(28．60％)较高(X2=6．9，P<0．01)。1岁以下患儿的病毒感染阳性数为88例，占总阳性数的67．7％。六岁以上患儿的病毒检出率(83％)较小于六岁组(40．3％)明显下降(X2=9．6,P<0．01)。本组患儿的病毒检出率有明显的季节变化，1-3月、4-6月、7-9月及10-12月的检出率分别为37．20％、30．10％、32．30％及53．40％。其中10-12月份的检出率(53．40％)与1-9月份平均检出率(33．8％)相比有显著差异(X2=9．35，P<0．01)。 结论： 1．nestedRT-PCR检测用于HRV基因诊断具有快速、操作简便及特异性较强的特点，可应用于临床检测，HRV基因组具有高度变异的特点。 2．病毒病原在本地区小儿ALRTI中占有重要地位。小儿病毒性ALRTI以6岁以下患儿为常见，男孩偏多，尤以1岁以下年龄组多见。病毒性ALRTI有明显的季节分布，本地区以第四季度为最高。 3．本地区小儿病毒性ALRTI中，以RSV及HRV占为主要地位，ADV、PIV及IFV相对少见。少见混合性病毒感染。 4．HRV所致小儿ALRTI以3岁以下儿童多见，尤以1岁以下为多。在本地区，HRV感染主要集中于春秋两季。 5．RSV所致小儿ALRTI以l岁以下年龄段为主。季节以秋、冬、春三季气温较低的时节多发。

目录

前 言

第一部分上海地区儿童急性下呼吸道感染鼻病毒的套式逆转录聚合酶链反应检测

第二部分上海地区儿童急性下呼吸道鼻病毒感染的临床流行病学横断面研究

全文总结

本课题的创新点

参考文献

综述1鼻病毒的研究现状

综述2禽流感研究进展及其对儿童的危害

论文小儿急性胰腺炎106例临床分析

参编第15章儿童和新生儿红斑狼疮

致 谢

获奖情况

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