韧带样型纤维瘤病中8号染色体异常及Wnt通路中APC和β-catenin基因突变的研究

摘要

目的 研究韧带样型纤维瘤病的临床病理学特点、8号染色体数目异常以及Wnt通路中APC(AdenomatosisPolyposisColi，APC)、β-catenin(Cadherin-AssociatedProteinbeta1，CTNNBl)基因突变及相关蛋白表达，探讨韧带样型纤维瘤病的发病机制。 方法 1．收集96例韧带样型纤维瘤病的临床及病理学资料，分析其临床病理特点。2．运用免疫组织化学EnVision+两步法检测69例存档石蜡包埋组织中β-catenin、cyclinDl、c-myc、Ki-67等蛋白的表达；用DNA末端转移酶介导的缺口标记法(TerminalDeoxynucleotidylTransferasebiotin-dUTPNickEndLabeling，TUNEL)检测病变中细胞凋亡；用聚合酶链反应(PCR)．变性液相高效质谱分析(DenaturingHighPerformanceLiquidChromatography,DHPLC)．直接测序的方法检测APC和β-catenin基因突变。 3．运用间期细胞荧光原位杂交(FluorescenceinSituHybridization，FISH)方法检测20例存档石蜡包埋组织中8号染色体数目异常。 4．透射电镜分析观察2例新鲜手术标本中肿瘤的超微结构特点。 结果 1．96例韧带样型纤维瘤病病例中男20例，女76例，男女之比为1：3．8，年龄范围8～86岁，中位年龄30．5岁，40岁以下患者女性比例(85．0％)显著高于男性(15．0％)，40岁以后这种差异消失。腹部以外部位病变占44．8％，腹壁病变占35．4％，盆腔病变占10．4％，肠系膜病变占9．4％。复发性病例占14．6％，复发间隔时间从6个月到72个月不等，复发性病变患者的年龄显著低于原发性病变患者。 2．韧带样型纤维瘤病大体形态因部位而异，多表现为局部肿块，质地韧，切面粗糙，灰白编织状。显微镜下病变界限不清，由形态一致的梭形细胞组成。 电镜下肿瘤细胞显示纤维母细胞和肌纤维母细胞分化，分布在胶原原纤维周围。肌纤维母细胞分化的细胞有应力纤维、纤维连接复合体等结构。肿瘤细胞均表达vimentin，部分病例还表达a-SMA、desmin。 3．20例韧带样型纤维瘤病中8号染色体三体(trisomy8)阳性的病例6例，阳性率为30．0％(6／20)。8例复发病例中trisomy8阳性5例，阳性率为62．5％，显著高于原发病例的8．3％(1／12)。 4．韧带样型纤维瘤病中APC和(或)β-catenin基因总的突变率为40．6％，其中APC基因突变位于密码子的1341、1355、1432、1493、1537位点，为体细胞碱基置换，突变率为26．1％(18／69)，突变不产生截短APC蛋白；β-catenin基因突变位于codon41位点，为体细胞碱基转换，突变率为18．8％(13／69)，导致第3外显子的codon41处苏氨酸磷酸化位点转变为丙氨酸。 5．β-catenin蛋白异常表达阳性率为47．8％(33／69)，cyclinDl和c-myc蛋白阳性率为43．5％(30／69)和44．9％(31／69)。APC、β-catenin基因突变与β-catenin蛋白的异常表达没有相关关系。β-catenin基因突变阳性的病例其cyclinDl表达阳性率(69．2％,9／13)显著高于突变阴性病例的cyclinDl阳性率(37．5％,21／56)。p．catenin蛋白异常表达阳性病例的c-myc蛋白阳性率(69．7％，23／33)显著高于阴性病例的c-myc阳性率(22．2％，8／36)，而cyclinDl蛋白没有表现出这种差异性。 6．在69例韧带样型纤维瘤病中，Ki-67仅有个别细胞阳性。细胞凋亡不明显，凋亡指数AI(apoptosisindex，AI)从0．01．0．05不等，平均0．022。β-catenin蛋白异常表达阳性病例和阴性病例之间AI没有显著差异，而cyclinDl、c-myc蛋白表达阳性的病例其AI显著低于阴性病例。 7．在对石蜡切片预处理并优化试验条件的情况下，20例存档石蜡块包埋组织的FISH检测结果可以用于分析。DHPLC方法分析基因突变与测序的符合率为100％，操作简便，灵敏度高特异性强。 结论 1．韧带样型纤维瘤病多发生于年轻女性，腹部以外和腹壁部位多发。 2．韧带样型纤维瘤病的形态因病变部位而异，组织学显示为形态一致的梭形纤维母细胞和肌纤维母细胞的增生和明显的胶原间质背景。肌纤维母细胞显示应力纤维、纤维连接复合体、中间连接和缝隙连接等结构。 3．韧带样型纤维瘤病中复发病例的trisomy8阳性率显著高于原发病例，可能用来确定某些具有高复发风险的韧带样型纤维瘤病亚型。 4．韧带样型纤维瘤病中APC、β-catenin基因存在突变，Wnt通路存在异常，可能在肿瘤的发生发展中起到一定的作用。 5．韧带样型纤维瘤病中Wnt通路异常等改变对肿瘤发生发展的促进作用可能是通过抑制细胞凋亡实现的，从而为韧带样型纤维瘤病的综合治疗提供了一个新的思路，对临床治疗手段的选择有一定的参考意义。 6．石蜡包埋组织适当处理后FISH检测结果准确而特异，DHPLC分析遗传学改变简便易行，两种方法都有一定的临床病理学应用价值。

目录

前言

第一部分韧带样型纤维瘤病的临床病理学特点

第二部分韧带样型纤维瘤病中8号染色体异常的检测及其意义

第三部分韧带样型纤维瘤病中APC和β-catenin基因突变及相关蛋白表达的研究

总结

综述韧带样型纤维瘤病的病理学和遗传学研究进展

缩略词表

攻读博士学位期间发表论文及会议交流

攻读博士期间所获奖励

致谢

论文独创性声明及论文使用授权声明