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第一章猪繁殖与呼吸综合征研究概述
1.1猪繁殖与呼吸综合征的流行病学特点
1.2猪繁殖与呼吸综合征的临床症状和病理学变化
1.2.1 临床症状
1.2.2病理变化
1.3猪繁殖与呼吸综合征的诊断
1.3.1血清学诊断技术
1.3.2分子生物学诊断技术
1.3.3其它检测技术
1.4猪繁殖与呼吸综合征的防治
第二章猪繁殖与呼吸综合征病毒概述
2.1猪繁殖与呼吸综合征病毒的理化性质
2.2猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构及其研究进展
2.3猪繁殖与呼吸综合征病毒基因变异与侵入机理
2.3.1病毒基因变异与重组
2.3.2病毒的侵入机理
2.4猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组编码蛋白的结构与功能
2.4.1主要结构蛋白
2.4.2次要结构蛋白
第三章猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展
3.1 PRRS传统疫苗
3.1.1 PRRS灭活疫苗
3.1.2 PRRS弱毒疫苗
3.2 PRRS新型疫苗研究进展
3.2.1基因疫苗
3.2.2亚单位疫苗
3.2.3活载体疫苗
3.3展望
第四章猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3、ORF5双基因重组真核表达载体的构建
4.1材料
4.1.1 PRRSV病料与工程菌
4.1.2引物的设计和合成
4.1.3主要试剂
4.1.4主要仪器
4.1.5培养基及配制
4.2方法
4.2.1 ORF3、ORF5基因的获得
4.2.2克隆载体pMD-ORF3的构建
4.2.3克隆载体pMD-ORF3的PCR与酶切鉴定
4.2.4克隆载体pMD-ORF3-ORF5的构建
4.2.5克隆载体pMD-ORF3-ORF5的鉴定
4.2.6重组真核表达载体pcDNA4.0-ORF3-ORF5的构建
4.2.7真核表达载体pcDNA4.0-ORF3-ORF5的鉴定
4.3结果
4.3.1 ORF3、ORF5基因的获得
4.3.2克隆载体pMD-ORF3的PCR与酶切鉴定
4.3.3克隆载体pMD-ORF3-ORF5的鉴定
4.3.4真核表达载体pcDNA4.0-ORF3-ORF5的鉴定
4.4讨论
4.5小结
第五章猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3、ORF5、ORF6三基因重组真核表达载体的构建
5.1材料
5.1.1质粒、PRRSV病料与工程菌
5.1.2引物的设计和合成
5.1.3主要试剂
5.1.4主要仪器
5.1.5培养基及配制
5.2方法
5.2.1 ORF6基因的获得
5.2.2重组真核表达载体pcDNA4.0-ORF6的构建
5.2.3真核表达载体pcDNA4.0-ORF6的鉴定
5.2.4真核表达载体pcDNA4.0-ORF6-ORF3-ORF5的构建
5.2.5真核表达载体pcDNA4.0-ORF6-ORF3-ORF5的鉴定
5.3结果
5.3.1 ORF6基因的获得
5.3.2真核表达载体pcDNA4.0-ORF6的鉴定
5.3.3真核表达载体pcDNA4.0-ORF6-ORF3-ORF5的鉴定
5.4讨论
5.5 小结
第六章重组真核表达质粒注射小鼠的免疫学研究
6.1材料
6.1.1质粒和菌种
6.1.2试验动物
6.1.3主要试剂及配制
6.1.4主要仪器
6.2方法
6.2.1重组质粒的大量提取与纯化
6.2.2试验小鼠分组及采样
6.2.3清抗体的ELISA检测
6.2.4 血清中和抗体的检测
6.2.5 pcDNA4.0-ORF6-ORF3-ORF5在小鼠体内的动态分布
6.3结果
6.3.1血清抗体的ELISA检测
6.3.2 血清中和抗体的检测
6.3.3 pcDNA4.0-ORF6-ORF3-ORF5在小鼠体内的动态分布
6.4讨论
6.4.1重组真核表达质粒疫苗的免疫保护效果
6.4.2影响重组真核表达载体疫苗免疫效果的因素
6.4.3重组真核表达载体疫苗面临的问题及应用前景
6.5 小结
结 论
参考文献
致谢
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