中国荷斯坦牛leptin基因多态性及其与产奶性能的关系

摘要

Leptin是leptin基因在脂肪组织表达的一种蛋白质，已证明该基因单核苷酸多态性与奶牛的繁殖力、产奶量、体细胞计数、乳蛋白率等性状相关。本研究检测了中国荷斯坦牛leptin基因启动子区与外显子2区多态性，并进一步分析了这些多态性与产奶性能的关系，结果如下： 以抽样的190头中国荷斯坦牛为研究对象，通过运用PCR-RFLP方法，对leptin基因外显子2区E2JW位点和E2FB位点进行了单核苷酸多态性检测，并获得不同基因型，然后结合DHI数据，设计混合模型，应用软件SAS8.2分析了两个多态位点对产奶性能的影响；另外，通过运用PCR-SSCP方法对该基因启动子区进行多态性检测，发现了5种基因型(AA、AB、AC、BB、BC)，测序证实此序列存在3个等位基因(A：528<'C>-617<'G>-618<'C>，B：528<'C>-617<'A>-618<'T>，C：528<'T>-617<'G>-618<'C>)，并且包含UASMS2(即1528 <'C/T>)和PSD(即617<'G/A>-618<'C/T>)两个多态位点，而PSD多态位点则为首次发现，并用同样的数据统计方法分析了此序列多态性对产奶性能的影响。结果发现： 在leptin基因外显子2区，E2JW多态位点对乳脂率(P=0.02)、305天产奶量(P=0.03)的影响显著，E2FB 态位点对乳蛋白率的影响显著(P=0.04)。在分析E2JW和E2FB两多态位点交互效应时，对于305天产奶量来讲，MM<'*>PQ和MM<'*>QQ基因型牛个体与MN<'*>PP基因型牛个体差异显著；NN<'*>PQ基因型牛个体分别与MM<'*>PP、MM<'*>QQ和MN<'*>QQ基因型牛个体差异显著；但此交互效应对牛乳蛋白率、乳脂率、体细胞计数影响均不显著。在leptin基因启动子区，本研究序列多态性与3057~产奶量显著相关；对于乳脂率来讲，AB基因型牛个体(P=0.03)和IBB基因型牛个体(P=0.04)均与BC基因型牛个体之间均存在显著性差异；但此序列多态性对乳蛋白翠和SCC的影响不显著(P>0.05)。因此，leptin砌基因外显子2区E2FB多态位点可以作为中国荷斯坦牛305天产奶量和乳脂率的一个遗传分子标记，E2JW多态位点可以作为影响奶牛乳蛋白率的一个遗传分子标记，而E2FB和E2Jw两个多态位点交互作用共同影响305天产奶量(P=0.045);启动子区UASMS2和PSD多态位点可作为影响乳脂率和305天产奶量的遗传分子标记。

目录

论文说明：符号说明

声明

1引言

1.1 DNA分子标记

1.1.1 PCR

1.1.2 RFLP

1.1.3 SNP

1.1.4其它DNA分子标记

1.2与产奶性状相关的几个候选基因

1.2.1牛催乳素基因

1.2.2牛生长激素和生长激素受体基因

1.2.3 κ-酪蛋白基因

1.2.4摇摆基因

1.2.5甘油酰基转移酶基因

1.3肥胖基因

1.3.1 Leptin的生理功能

1.3.2牛leptin基因多态性与生产性能的关系

1.4与产奶性能相关的QTL研究进展

1.5本研究的目的和意义

2材料与方法

2.1材料

2.1.1实验样品的来源、采样方法及DHI数据

2.1.2主要仪器设备及实验试剂

2.2方法

2.2.1基因组DNA提取

2.2.2引物设计

2.2.3 Leptin基因外显子2区多态性检测

2.2.4 Leptin基因启动子区多态性检测

2.2.5 PCR产物回收测序

2.3统计分析方法

2.3.1数据统计分析

2.3.2同源性比对分析

3结果与分析

3.1基因组DNA

3.2 Leptin基因外显子2区多态性检测结果

3.3 Leptin基因启动子区多态性检测结果

3.4 Leptin基因多态性与产奶性能的关系

3.4.1 Leptin基因外显子2区

3.4.2 Leptin基因启动子区

4讨论

4.1 Leptin基因外显子2区

4.1.1 E2FB SNP

4.1.2 E2JW SNP

4.1.3 E2FB和E2JW两多态位点交互效应

4.2 Leptin基因启动子区

4.3误差分析

5结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文

个人简介