检测骨髓和外周血中hMAM、MUC1对乳腺癌微转移的研究

摘要

背景与目的：乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一。乳腺癌是导致病人因癌症死亡的第二位原因，其发病呈逐年上升的趋势，它治疗失败50％是因为远处转移。乳腺癌一旦发生即认为是全身性疾病，且早期也可发生肿瘤细胞的全身扩散。尽管大约80％以上的乳腺癌患者在诊断前未有远处转移的征象，但仍有约40％的病人在5年内发生转移而导致治疗失败。乳腺癌细胞真正形成转移灶需要一定的过程，而微转移的是其形成转移灶的前提。微转移是指在各种机体组织、体液及细胞移植物中检测到的镜下及亚显微镜水平的一定的肿瘤残留，但在骨髓，外周血和淋巴结中发现一个或少量瘤细胞并不一定是微转移而是少量游离瘤细胞的播散，这些瘤细胞要成为真正的转移灶还须黏附于血管壁，穿出管壁，在管外组织中增生。这个过程还同时伴随基质反应和新生血管生成。大部分播散在血中的游离瘤细胞均迅速被机体消灭，真正形成微转移灶的仅有一小部分，但游离细胞的存在可说明有休眠肿瘤细胞播散到远处<'[1]>。乳腺癌患者中骨髓是最易发生转移的部位，且骨髓往往为最先发现转移的部位。检测骨髓微转移最常用的实验室技术源于免疫组织化学、免疫细胞化学和分子生物学，目前RT-PCR检测微转移是目前敏感性最高的方法，可检测出10<'6>～10<'7>个细胞中一个肿瘤细胞，其敏感性分别是免疫组织化学和流式细胞术的10倍和100倍以上。早期发现乳腺癌微转移是改善预后和降低乳癌死亡率一个重要的方法，如果能在发生远处转移的早期及时诊断出微转移并加以有效控制，可改善患者预后。 随着乳腺癌研究的不断深入，人们对血和骨髓中的微转移的检测和意义有了一定的认识，大量的研究结果表明，认识和判断有无肿瘤转移、转移渠道及范围，对临床诊断、治疗及预后判断具有十分重要的意义。常规病理技术不能很好的确定存在于血液和骨髓中的微转移灶，随着近年来免疫学和分子生物学技术的发展和应用，拓宽了检测微转移的途径，将使广泛应用RT-PCR检测肿瘤指标成为可能。应用RT-PCR检测微转移的前提是确定能够证实乳腺癌存在的标志物，乳腺癌微转移研究中对CKl9、CEA、hMAM等多种肿瘤标志物均有报道，但仍未发现合适的标志物。骨髓是发生微转移的主要且较早的组织，但外周血较之更宜取得，外周血如能否取代骨髓作为微转移的检测标本?将更方便于早期检测出乳腺癌的微转移。本文将采用对MUCl、hMAM两种标志物在外周血和骨髓中的表达的试验对微转移的检测做进一步的研究。 材料和方法：试验中外周血标本是从63例乳腺癌患者手术麻醉后从肘静脉或大隐静脉中取得6ml，骨髓穿刺采用胸骨一点穿刺，在手术中游离患者患侧胸部皮瓣到胸骨中线后以19号空针穿刺取得6ml。另外我们还在无乳腺疾病的10名患者中抽取6ml外周血。标本六小时内进行有核细胞分离后继续试验或在细胞冻存液中-80℃冷冻保存以备下次试验使用。采用RT-PCR．试验方法，检测63例乳腺癌患者的外周血和骨髓中有无hMAM、MUCl的mRNA的表达以判断是否有微转移灶的存在，比较外周血与骨髓标本检测的敏感性;比较两种指标的阳性率以及比较其与常规的病理检测指标的关系。 结果：RT-PCR方法的敏感性可达到能在10<'6>个血单核细胞中检测出一个肿瘤细胞，且较常用的放射免疫方法更灵敏。通过RT-PCR方法检测63位患者的外周血和骨髓标本中hMAM和MUCl的mRNA，在检测微转移中hMAM要比MUCl灵敏，其表达与腋窝淋巴结转移、肿瘤大小、ER和C-erbB-2的表达情况有关，而与肿瘤类型、年龄、PR的表达情况和是否停经无关。本试验均未在良性的乳腺肿瘤和志愿者的外周血中检测到此两种标志物的mRNA的表达。 结论：与其它的乳腺癌评价指标相比，乳腺癌外周血和骨髓中的微转移是乳腺癌的相对独立预后因子；多种标本和肿瘤标志物的联合检测，可提高检出的阳性率，从而更早的发现微转移，尽早采取必要的手段进行治疗；骨髓是检测微转移的首选标本，但在检测hMAM或联合检测hMAM和MUCl时外周血标本可替代骨髓标本，这样宜于检测标本的获取；RT-PCR是检测乳腺癌微转移的有效的手段。

目录

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前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

致谢

附录一：攻读硕士学位期间发表的及拟发表的学术论文