抗子宫内膜抗体对大鼠妊娠及其结局的影响的研究

摘要

目的：研究抗子宫内膜抗体 (Antiendometrial antibody，EMAb)对大鼠妊娠及其结局的影响，探讨不孕及自然流产的发病原因及发病机理，为临床治疗提供指导，并为免疫性避孕提供线索。 方法：将68只大鼠随机分为三组：A组、实验组低剂量组(n=24)：大鼠腹腔内缓慢注射纯化人子宫内膜抗原(Endometrial antigen，EMAg)90μg/kg，一月后同等剂量加强一次；B组、实验组高剂量组(n=24)：大鼠腹腔内缓慢注射纯化人子宫内膜抗原180μg/kg，一月后同等剂量加强一次；C组、对照组(n=20)：在相同时间大鼠腹腔内缓慢注射生理盐水1ml。每组分别于第一次注射EMAg后第6周和第8周末经颈静脉窦取血2ml并分离血清，用间接ELISA法定性测定抗子宫内膜抗体(EMAb)，用电化学发光法(electrochemiluminescence，ECL)定量测定CA-125。第8周检测EMAb后，各组随机选取EMAb阳性的大鼠2只，剪开腹壁，摘取子宫并保存。此后，将各组剩余雌鼠与雄鼠以3：1的比例混养一周以交配妊娠。一周后将雌雄大鼠分笼，并将未孕雌鼠麻醉后剖腹摘取子宫并保存，已孕雌鼠于妊娠期间观察孕鼠有无流产迹象，并于妊娠21天后麻醉剖腹取胎并计数，然后摘取子宫，记录仔鼠数量、体重、身长和胎盘重量、直径，并于每只已孕雌鼠中随机留取2个胎盘。摘取的子宫和胎盘均置于4﹪的甲醛溶液中固定，并制成HE染色切片行病理组织学检查，观察其组织结构。采用SPSS13.0统计学软件系统做统计分析，EMAb阳性率、不孕率、流产率和畸形率以百分数表示，CA-125水平、孕鼠所产仔鼠数、仔鼠的体重和身长、胎盘的重量和直径以均数士标准差(x±s)表示，多个样本均数两两比较方差分析采用Newman-Keuls法。P<0.05为差异有统计学意义。 结果：1．EMAb阳性率：注射EMAg第6周末，各组EMAb阳性率分别为实验组低剂量组(A组)16.67﹪(4/24)，实验组高剂量组(B组)20.83﹪(5/24)，对照组(C组)0﹪(0/20)。另外实验组合并后即A+B组为18.75﹪(9/48)。各组之间无显著差异(P>0.05)。注射EMAg第8周末，各组EMAb阳性率分别为实验组低剂量组(A组)20.83﹪(5/24)，实验组高剂量组(B组)29.17﹪(7/24)，对照组(C组)为0﹪(0/20)。实验组合并后即A+B组为25.00﹪(12/48)。B组与C组、A+B组与C组之间均有显著差异(P<0.05)，A组与B组、A组与C组、之间无显著差异(P>0.05)。 2．CA-125水平：注射EMAg后第6周末，各组CA-125水平分别为实验组低剂量组(A组)25,58±0.06U/ml，实验组高剂量组(B组)25.56±0.07U/ml，试验组合并后即A+B组25.57±0.08U/ml，对照组(C组)25.55±0.10U／ml。各组之间无显著差异(P>0.05)。 注射EMAg后第8周末，各组CA-125水平分别为实验组低剂量组(A组)25.56±0.05U/ml，实验组高剂量组(B组)25.57±0.04U/ml，试验组合并后即A+B组25.56±0.03U/ml，对照组(C组)25.56±0.04U/ml。各组之间无显著差异(P>0.05)。 3．不孕率：雌雄大鼠混养一周后，各组不孕率分别为实验组低剂量组(A组)40.91﹪(9/22)，实验组高剂量组(B组)59.09﹪(13/22)，A组与B组中所有EMAb阳性者组[命名为E(+)组]62.50﹪(5/8)，A组与B组中所有EMAb阴性者组[命名为E(-)组]47.22﹪(17/36)，对照组(C组)15.00﹪(3/20)。B组与C组之间有极显著差异(P<0.01)，E(+)组与C组、E(-)组与C组之间有显著差异(P<0.05)，A组与B组、A组与C组、E(+)组与E(-)组之间无显著差异(P>0.05)。 4．流产率、畸形率：各组已孕母鼠妊娠期间均无流产迹象，且所产仔鼠无畸形，即各组流产率、畸形率均为0。 5．孕鼠所产仔鼠数：实验组低剂量组(A组)仔鼠数为10.77±1.79只(140/13，即仔鼠总数/孕鼠数)，实验组高剂量组(B组)仔鼠数为9.78±1.64只(88/9)，EMAb阳性者组[E(+)组]9.67±1.53只(30/3)，EMAb阴性者组[E(-)组]10.32±2.14只(198/19)，对照组(C组)仔鼠数为12.51±2.02只(213/17)。A组与B组，各组与C组均有显著性差异(P<0.01)，E(+)组与E(-)组之间无显著差异(P>0.05)。 6．仔鼠的体重和身长：各组仔鼠的体重分别为实验组低剂量组(A组)5.47±0.42g，实验组高剂量组(B组)5.43±0.32g，EMAb阳性者组[E(+)组]5.33±0.24g，EMAb阴性者组[E(-)组]5.48±0.41g，对照组(C组)5.55±0.36g。 E(+)与C组之间有显著差异(P<0.05)，其余各组与C组、A组与B组、E(+)组与E(-)组之间无显著差异(P>0.05)。各组仔鼠的身长分别为实验组低剂量组(A组)6.40±0.19cm，实验组高剂量组(B组)6.39±0.23cm，EMAb阳性者组[E(+)组]6.37±0.21cm，EMAb阴性者组[E(-)组]6.39±0.20g，对照组(C组)6.42±0.18cm。各组之间无显著差异(P>0.05)。 7．胎盘的重量和直径：各组胎盘的重量分别为实验组低剂量组(A组)0.67±0.06g，实验组高剂量组(B组)0.71±0.08g，EMAb阳性者组[E(+)组]0.74±0.05g，EMAb阴性者组[E(-)组]0.70±0.09g，对照组(C组)0.65±0.07g。A组与C组，E(+)组与E(-)组有显著性差异(P<0.05)，A组与B组，B组与C组、E(+)组与C组、E(-)组与C组均有极显著性差异(P<0.01)。 各组胎盘的直径分别为实验组低剂量组(A组)14.92±0.84mm，实验组高剂量组(B组)15.31±1.32mm，EMAb阳性者组[E(+)组]15.48±1.20mm，EMAb阴性者组[E(-)组]15.39±1.31mm，对照组低剂量组(C组)14.6±0.73mm。A组与C组有显著性差异(P<0.05)，A组与B组、B组与C组、E(+)组与C组、E(-)组与C组有极显著性差异(P<0.01)，E(+)组与E(-)组之间无显著差异(P>0.05)。 8．组织病理学检查：实验组EMAb阳性的未孕子宫内膜腺细胞排列欠规则，其内呈空泡改变，而对照组未孕子宫内膜腺细胞排列规则，其内无空泡改变。 实验组和对照组已孕子宫组织结构无明显差别，均为内膜腺体高度增生，呈乳突状或菜花状凸向宫腔，腺细胞呈高柱状，排列规则。 实验组和对照组胎盘组织结构无明显差别，均含有丰富的血液。 结论：1.采用大鼠腹腔注射纯化人子宫内膜抗原(EMAg)能诱导大鼠体内产生抗子宫内膜抗体(EMAb)。EMAb的阳性率与注射的子宫内膜抗原(EMAg)剂量无关。 2．抗子宫内膜抗体(EMAb)能够降低大鼠的受孕率，并使其产仔数量及仔鼠体重下降。 3．抗子宫内膜抗体(EMAb)能够导致大鼠胎盘的重量和直径增加，且与注射的子宫内膜抗原(EMAg)剂量有关：高剂量组(1801μ/kg)明显高于低剂量组(90μg/kg)。

目录

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符号说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

综述　抗子宫内膜抗体与不孕、自然流产的关系

参考资料

附图

致谢

攻读学位期间发表的学术论文