PI3K-Akt/eNOS的激活在兔肺远处后适应中心肌保护作用的研究

摘要

目的:建立兔心肌缺血.再灌注模型,以左肺为远处后适应目标器官,观察以肺脏短暂缺血-再灌注为后处理,对心肌缺血.再灌注损伤的保护作用。并探讨PI3K-Akt/eNOS通路在远处后适应中对缺血.再灌注心肌保护中所发挥的作用。
　　 方法:30只日本大耳兔随机分为对照组(control C组)、实验组(remote ischemicposconditioning RIP组)和L-NAME处理组(L组),每组各10只。对照组(controlC组):结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min,阻断30min后开放LAD,心肌再灌注180min。实验组(RIP组):在左前降支阻断24min时阻断左肺动脉3min,然后开放肺动脉3min,最后开放左前降支,心肌再灌注180min。L-NAME处理组(L组):冠脉左前降支组单24min时阻断左肺动脉3min,然后开放肺动脉3min,并同时注射L-NAME,最后开放左前降支,心肌再灌注180min。分别于气管插管成功后(缺血前)、再灌注开始前、再灌注180min后3个时间点由左颈静脉采血2-4ml,检测血清中SOD活性及MDA、CK含量。实验终点处死动物,取心肌组织采用免疫组化法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)与蛋白激酶B(Akt)在心肌细胞中的表达。使用脱氧核苷酸末端转移酶介导的x2dUTP缺口末端标记(TdT2m ediatedx2dUTP nickend labeling,TUNEL)技术检测心肌细胞凋亡指数。取左、右肺组织,使用HE染色观察肺组织损伤情况。
　　 结果:
　　 1、血清生化指标:缺血前与灌注开始前各组间SOD活性与MDA、CK含量均无显著差异。再灌注180min后,RIP组SOD活性显著高于C组及L组(P<0.05)。MDA含量均显著低于C组及L组(P<0.05)。CK含量均显著低于C组及L组(P<0.05)。C组与L组组间SOD活性、MDA及CK含量无显著差异(P>0.05)。
　　 2、免疫组化及细胞凋亡指数:RIP组心肌细胞中Akt表达较C组及L组增强(P<0.05)；eNOS表达较C组及L组增强(P<0.05)；凋亡指数较C组及L组降低(P<0.05)。
　　 3、肺组织HE染色检查:各组左、右肺组织石蜡切片HE染色,400倍光镜下观察,细胞形态基本完整,未见明显间质水肿及细胞破坏,未见明显肺泡壁充血改变。各组肺组织目测下无明显差异。
　　 结论:
　　 以肺脏为目标器官,在心脏再灌注早期对左肺施以短暂缺血-再灌注处理,可以达到减少心肌细胞损伤的作用。肺脏远处后适应所致心肌保护作用,可能是通过激活PI3K-Akt途径后,进一步激活下游eNOS,产生抗心肌细胞凋亡作用,达到保护缺血.再灌注心肌细胞目的。短暂缺血.再灌注对肺脏无明显损伤。以肺脏作为远处器官安全、可靠。未来对以肺脏为远处器官的远处后适应需进行更加深入的研究。