铅、镉对SD大鼠肾脏损伤及抗氧化剂拮抗作用的研究

摘要

铅、镉均为广泛分布于自然界的环境和工业污染物，可通过环境污染和职业性暴露进入人和动物机体，对多种器官产生毒性作用，其中肾脏是铅、镉作用的主要靶器官之一。研究发现自由基的大量产生与其导致的氧化应激是铅、镉毒性损伤的生化和分子机理之一。本试验通过灌服染毒SD大鼠和对原代培养肾小管上皮细胞的染毒，同时添加抗氧化剂(NAC、Se-Met)，探讨铅、镉对肾脏的损伤及抗氧化剂的拮抗作用。 1．为了研究铅、镉单独或联合慢性暴露引起SD大鼠的氧化损伤和肾脏组织结构变化，及抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)的保护作用，用不同剂量的铅、镉连续灌服大鼠4周，试验结束后测定肾脏和血浆SOD、GSH-Px活性及MDA含量，观察肾脏组织学和超微结构变化。结果显示，与对照组比较，铅、镉单独染毒肾脏和血浆SOD、GSH-Px活性及MDA含量均显著升高(P<0.05)；铅、镉联合染毒，血浆和肾脏SOD、GSH-Px的活性比对照组显著下降(P<0.05)，MDA含量显著升高(P<0.05)；添加NAC组与铅、镉联合染毒比其血浆GSH-Px活性显著升高(P<0.05)，MDA含量显著下降(P<0.05)；组织学观察显示，铅、镉单独或联合染毒均可导致肾小管管腔内蛋白渗出，管腔变窄甚至闭合，肾小管上皮细胞肿胀、浑浊等病变，添加NAC后，有肾小管管腔亦有蛋白渗出，肾小管上皮细胞肿胀和肾小球体积缩小现象；超微结构显示染毒组肾脏线粒体形态不规则，体积膨胀，基质混浊，脊突断裂或缺损，添加NAC组线粒体形态基本完好，但基质浓密不清。由此可见，脂质过氧化作用增强是铅、镉引起肾脏损伤的主要机制之一，可能也是铅、镉引起肾脏组织病变的原因之一，NAC能有效缓解铅、镉引起的氧化损伤，但对肾脏组织结构的损伤无明显的保护作用。 2．为了揭示铅、镉对肾小管上皮细胞凋亡率和细胞内活性氧水平的影响，本研究在建立了原代培养肾小管上皮细胞的基础上，用不同浓度铅、镉染毒12h，同时设Se-Met拮抗组，流式细胞仪检测细胞内活性氧水平和细胞凋亡率。结果显示，低浓度(10μmol/L)的铅、镉单独染毒组细胞内活性氧水平低于对照组；中(20μmol/L)、高(40μmol/L)浓度组细胞活性氧水平均显著高于对照组；铅镉联合组细胞活性氧水平均明显高于对照组；Se-Met能明显降低低浓度铅镉(5μmol/L+5μmol/L) 联合染毒组细胞内活性氧水平，对中(10μmol/L+10μmol/L)、高(20μmol/L+20μmol/L)浓度铅镉联合组细胞活性氧水平无明显影响；铅、镉单独染毒时，所有组细胞凋亡率均显著高于对照组，且细胞凋亡率随浓度升高而先升高后下降，而坏死率则随浓度升高而增加。添加Se-Met能有效拮抗铅、镉联合染毒细胞的凋亡率，但随着铅、镉浓度增加，拮抗的效果随之减弱。本研究结果证实了铅、镉染毒后引起的活性氧增加和导致的氧化应激，是铅、镉对肾脏毒性损伤的重要机理之一，抗氧化剂在一定范围内能有效拮抗铅、镉引起的氧化应激，但对铅、镉引起的组织损伤无明显的保护作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

综述一：铅、镉中毒与氧化应激关系研究进展

综述二：自由基与细胞凋亡关系研究进展

第一部分体外培养大鼠肾小管上皮细胞模型的建立

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果

2.1原代培养细胞观察

2.2细胞鉴定结果

2讨论

第二部分铅、镉对SD大鼠的氧化损伤及乙酰半胱氨酸的保护作用

1材料与方法

1.1仪器与试剂

1.2实验方法

2结果

2.1铅、镉对大鼠肾脏和血浆SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响

2.2铅、镉染毒对大鼠肾脏组织显微结构的影响

2.3铅、镉染毒对大鼠肾脏组织超微结构的影响

3讨论

第三部分铅、镉对肾小管上皮细胞凋亡率和活性氧水平的影响及抗氧化剂的拮抗作用

1材料与方法

1.1仪器与试剂

1.2实验方法

2结果

2.1镉对肾小管上皮细胞凋亡率与细胞内活性氧水平的影响

2.2铅对肾小管上皮细胞凋亡率与细胞内活性氧水平的影响

2.3铅镉联合对肾小管上皮细胞凋亡率与细胞内活性氧水平的影响及硒代蛋氨酸的拮抗作用

3讨论

第五部分结论

参考文献：

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