NO对E.tenella卵囊的抑制特性及其机理研究

摘要

球虫病历来是危害养禽业的主要疾病之一，给世界养禽业造成了巨大的经济损失。由于鸡球虫耐药虫株的频繁出现以及疫苗免疫效果的不稳定性使得该病仍较难控制，因此开发完全新型的抗球虫药有巨大的实用价值。有研究发现NO供体GSNO能够抑制E．tenella的孢子生殖。为了进一步研究明确NO对球虫孢子生殖的抑制特性并探讨NO抑制球虫孢子生殖的作用机理，本论文进行以下内容的研究。 一、NO对球虫卵囊孢子生殖的抑制作用用酸化亚硝酸钠、盐酸、硫酸溶液处理新收取的未孢子化E．tenella卵囊，检查卵囊的孢子生殖情况。结果表明，20mmol/L酸化亚硝酸钠溶液对卵囊孢子生殖的抑制率可达100％；而不经酸化的亚硝酸钠和相同pH的盐酸和硫酸溶液对卵囊的孢子生殖没有明显影响。以GSNO、SNAP及Hb与新鲜球虫卵囊共孵育，结果表明，8mmol/LGSNO和SNAP能抑制球虫的孢子生殖，而NO清除剂Hb能消除GSNO和SNAP对球虫孢子生殖的抑制作用，并呈现剂量一效应关系。以上结果提示，NO能够抑制卵囊的孢子生殖。 二、GSNO对孢子化卵囊及孢子囊的作用本实验研究了NO对孢子化卵囊和孢子囊的活力和致病力的影响。以卵囊活力检测实验检测GSNO处理孢子化卵囊及孢子囊的子孢子脱囊率。结果显示，对照、GSNO处理的孢子化卵囊及孢子囊的子孢子脱囊率均分别为95.51％、57.21％、47.67％。用GSNO处理的孢子化卵囊和孢子囊接种雏鸡，根据临床球虫病发生情况和盲肠病变情况来评价NO对卵囊致病力的影响。结果显示，GSNO处理的孢子化卵囊在增重、病变记分、OPG值和盲肠荷虫数等方面差异不明显(P>0.05)；而GSNO处理的孢子囊在病变记分、OPG值和盲肠荷虫数显著低于对照(P<0.05)。以上结果表明，NO能降低孢子化卵囊及孢子囊的子孢子脱囊率；NO对孢子化卵囊的致病力没有明显抑制作用，但能显著降低孢子囊的致病力。 三、GSNO对E．tenella卵囊内LDH、G6PD和ACO的活性的影响采用PAGE法检测GSNO对囊与糖代谢有关内LDH、G6PD和ACO活性的影响。酶特异染色结果显示：GSNO处理的卵囊中LDH活性无明显变化，G6PD活性有所降低；无论GSNO处理与否，卵囊的线粒体和细胞质中均有ACO活性，但线粒体内ACO活性较高。以上结果表明，GSNO对卵囊内对LDH和ACO的活性无明显抑制作用或此抑制作用是可逆的，但能降低G6PD的活性。四、GSNO对E．tenella内HSP70表达和SOD活性的影响本实验研究了NO对球虫自身防御系统的攻击作用以及对自身抗氧化能力有关的酶破坏的作用。采用ELISA和流式细胞仪检测了GSNO处理对E．fPnella卵囊内HSP70表达的影响，结果表明，GSNO处理对HSP70的表达没有明显影响；卵囊孢子化6h后HSP70表达量比未孢子化卵囊明显增加。用PAGE法分析GSNO对卵囊内SOD活性的影响，酶特异染色的结果表明，与对照组一样，GSNO处理的卵囊中亦有SOD活性，此SOD初步鉴定为Cu·Zn-SOD。以上结果表明，GSNO对球虫的HSP70的表达无显著影响；GSNO对球虫内SOD的活性无明显抑制作用或具可逆抑制作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

综述

1抗球虫药概述

1.1常用抗球虫药

1.2球虫疫苗

1.3中草药

1.4新型抗球虫药—NO

2一氧化氮的研究概况

3一氧化氮生物合成的调节

4常见的一氧化氮供体及其药理作用

4.1常见的一氧化氮供体

4.2一氧化氮供体的药理作用

5一氧化氮在球虫感染中的作用

5.1抗感染机制

5.2在抗感染中的作用

第一部分NO对球虫卵囊的抑制特性

试验一NO对球虫卵囊孢子生殖的抑制作用

1材料与方法

2结果

3讨论

试验二GSNO对孢子化卵囊、孢子囊活力及致病的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

第二部分NO抑杀鸡球虫孢子生殖的机理研究

试验一GSNO对E.tenella内LDH、G6PD和ACO活性的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

试验二GSNO对E.tenella内HSP70表达和SOD活性的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

第三部分结论

参考文献

攻读硕士期间发表的学术论文

致谢