京海黄鸡MC4R基因多态性与生长性状相关性的研究

摘要

黑素皮质素受体4(MC4R)是下丘脑腹内侧核(VMH)分泌的一类肽类物质，为黑素皮质素家族5个成员之一。MC4R属于G-蛋白耦联受体(GPCRS)超级家族，为跨膜神经受体。MC4R可与脑部分泌的天然内源配体a-促黑激素(a-MSH)结合，抑制体重的增加。在哺乳动物中，MC4R具有介导Leptin蛋白的功能，是一个调节能量平衡与能量动态平衡的重要的信号分子，其主要作用是控制食欲、体重、能量代谢。本研究采用PCR-SSCP和DNA直接测序的方法检测了京海黄鸡MC4R不同的基因片断的多态性，对单核苷酸多态性进行了群体遗传学分析。同时进行了基因多态位点与生长性状的关联分析。结果如下： l MC4R基因2对引物在实验鸡群体的PCR扩增产物中都检测到三种基因型。且群体均处于Hardy-Weinberg不平衡状态，可能与该品种黄鸡选择有关。 2 MC4R基因外显子的突变引物P1扩增片段经PCR-SSCP检测发现在MC4R基因DNA的662bp处发生的G→C的突变；MC4R基因外显子的突变引物P2扩增片段经PCR-SSCP检测发现在MC4R基因DNA的733-734bp之间插入一个C碱基。 3 MC4R基因引物P1扩增片段的各种基因型与京海黄鸡群体的生长性状的相关性分析结果显示该位点B等位基因与京海黄鸡群的各周龄体重呈负相关。 4 MC4R引物P1扩增片段与京海黄鸡群体的屠宰性状和体尺性状的统计分析结果显示该位点杂合的．AB型对脏器和体尺性状的选择影响较大。 5 MC4R基因引物P2扩增片段不同基因型与京海黄鸡群体的生长性状的相关性分析结果显示该插入位点与京海黄鸡的各周龄体重呈正相关。 6 MC4R基因引物P2扩增片段不同基因型与京海黄鸡群体的屠宰性状和体尺性状的统计分析结果显示该插入位点与京海黄鸡各种屠宰性状和体尺性状指标呈正相关。 7 MC4R基因引物P1、P2扩增片段不同基因型间组合效应与京海黄鸡生长性状的关系分析中，以AA/DD型组合最佳。综合分析结果MC4R基因引物P1和P2扩增片段的多态位点对鸡的生长性状有重要的影响，可以尝试将其作为生长性状的分子标记用于鸡的标记辅助选择。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1 MC4R的研究进展

2 MC4R的结构及生理功能

3 MC4R的调控

3.1MC4R激动剂

3.2 MC4R抑制剂

4与MC4R有关的体重调节体制

5 MC4R基因的结构

6 MC4R基因突变与体重调节

7鸡MC4R基因的研究现况

8研究的目的和意义

第二章京海黄鸡MC4R基因的多态性检测

1实验材料

1.1试验动物及采样方法

1.2主要仪器和药品

1.3分析工具软件

2试验方法

2.1鸡血液基因组DNA的提取方法

2.2DNA浓度和纯度的检测

3 MC4R基因的PCR-SSCP检测

3.1引物设计

3.2引物的合成和稀释

3.3最佳PCR反应条件和反应体系的建立

3.4 SSCP检测过程

3.5部分溶液的配置:

4遗传学统计分析方法

4.1群体基因频率和基因型频率

4.2 Hardy-Weinberg平衡态检验

4.3群体内遗传变异的度量指标——杂合度

4.4有效等位基因数

4.5多态信息含量

5结果与分析

5.1基因组DNA提取结果

5.2引物P1、P2的PCR产物检测结果

5.3 MC4R基因的SSCP多态性检测结果

5.4两对引物的PCR产物直接测序结果同源性比较

5.5基因MC4R两个多态位点的遗传分析结果

6讨论

6.1影响PCR扩增的因素

6.2 PCR-SSCP技术的运用

6.3测序

6.4 MC4R基因的遗传学分析

第三章MC4R基因与生长性状的关系

1统计模型

1.1配合模型(1)，比较不同基因型之间生长性状的关系

1.2配合模型(2)，比较两多态性位点不同基因型组合与生长性状的关系

2结果与分析

2.1 MC4R基因多态性位点(引物P1)与各周龄体重的关系

2.2 MC4R基因多态性位点(引物P1)与屠宰性状的关系

2.3 MC4R基因多态性位点(引物P1)与体尺性状的关系

2.4 MC4R基因多态性位点(引物P2)与各周龄体重的关系

2.5 MC4R基因多态性位点(引物P2)与屠宰性状的关系

2.6 MC4R基因多态性位点(引物P2)与体尺性状的关系

2.7 MC4R基因两多态性位点不同基因型组合与各周龄体重的关系

2.8 MC4R两多态性位点不同基因型组合与屠宰性能的关系

2.9 MC4R两多态性位点不同基因型组合与体尺性状的关系

3讨论

3.1引物P1扩增片段不同基因型与京海黄鸡生长性状的关系

3.2引物P2扩增片段不同基因型与京海黄鸡生长性状的关系

3.3引物P1、P2扩增片段不同基因型间组合效应与京海黄鸡生长性状的关系

3.4 MC4R基因的研究展望

总结论

参考文献

致谢

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