凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞疫苗抗肺癌的实验研究

摘要

第一部分凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞疫苗抗肺癌的实验研究 背景与目的：树突状细胞(dendriticcells,DCs)是目前已知功能最强的专职抗原呈递细胞，并能有效刺激初始免疫应答和记忆免疫应答，是启动、调控并维持特异性免疫应答的中心环节。肿瘤患者体内往往存在DCs功能缺陷，无法有效的提呈肿瘤抗原给T细胞，造成了免疫忽视或免疫逃逸，从而促进了肿瘤生长。通过体外制备肿瘤抗原特异性的DCs疫苗回输体内可能会改变这一状况。本实验从健康人外周血中诱导DCs，通过凋亡肿瘤细胞负载联合CD40单抗促进DCs成熟构建DCs疫苗，并用DCs疫苗激活抗原特异性的细胞毒性T细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)，观察其体内外抗肺癌的特性。 方法：采用常规Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMC)，培养2小时后贴壁细胞采用含GM-CSF(100~g／L)、IL-4(50~g／L)、10％FCS的RPMI-1640培养DCs，在DCs培养的第6天，以诱导凋亡的A549进行抗原负载(DCs：凋亡细胞=5：1)，24h后加入激发型CD40单克隆抗体(5mg／L)继续诱导2d，诱导DCs成熟；收集成熟的DCs与自体T细胞按l：50的比例混合共育7天，诱导抗原特异性的CTL细胞；流式细胞仪检测细胞表型变化；四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞毒活性；于裸鼠的的右腋皮下注射处于对数生长期的A549细胞5×106个／0．2ml，第16天选择荷瘤大小相似的裸鼠12只随机分为2组，每组6只。①生理盐水对照组：给予肿瘤局部注射生理盐水0．2ml作为空白对照；②CTL治疗组：给予肿瘤局部注射CTL1×107个／0．2ml；每周治疗1次，连续治疗3次。从治疗开始每7d测量肿瘤的最大纵径(a)及最大横径(b)1次，肿瘤体积=0．5×a×b2，观察肿瘤生长的情况。 结果：凋亡肿瘤细胞负载可使DCs上调表达CDla、CD80、CD83、CD86和HLA-DR，联合CD40mAb可进一步促进DCs的成熟；成熟DCs和自体的T细胞共育活化生成抗原特异性CTL；与未活化前相比，CTL的CD8+T细胞大幅度上调，并上调表达CD3、CD25、CD28、CD8／CD28分子；CTL对A549具有高效特异的杀伤力，明显强于CTL对肝癌细胞HepG2的作用(P

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引 言

第一部分凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗抗肺癌的实验研究

第二部分共培养的树突状细胞和CIK细胞抗肺癌的实验研究

结 论

树突状细胞疫苗在肿瘤免疫治疗中的应用

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致 谢

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