一种新型生防菌菌株OH11的鉴定和生防效果研究

摘要

从作物根际土壤中分离到1056株细菌，筛选出7个对辣椒疫霉病菌、瓜果腐霉病菌、甘薯软腐病菌、油菜菌核病菌、水稻纹枯病菌、棉花枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、茄根腐病菌、棉花黄萎病菌、番茄青枯病菌、甘蓝黑腐病菌、水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、马铃薯环腐病菌等重要植物病原菌具有较强拮抗作用的菌株。经形态学观察和16S rDNA序列分析，BOH3为荧光假单胞菌，BOH2、BOH5、BOH46、BOH108、BOH116为5种不同的芽孢杆菌，OH11为目前国内尚未报道的一种新型生防菌。 OH11分离自菜园土。革兰氏染色反应阴性，茵体杆状，无鞭毛，透射电镜观察，茵体0.4×1～6μm，长度随茵龄大小有变化。TSA平板上菌落颜色浅黄色至黄褐色，透明至半透明，产生可溶性褐色色素，菌龄越老色素产生越多。菌落圆形至不规则形，边缘光滑或啮齿状，菌落边缘可见稀薄扩散边缘，轮廓清晰，即滑行运动，液体培养粘质。菌株生长温度5-35℃，最适生长温度为28-30℃。 Biolog和其它生理生化试验结果表明：OH11能很好地利用D-纤维二糖、a-D-乳糖和蔗糖，且利用效果较L.enzymogenes ATCC29487标准菌株更好。具有脂酶活性，可以水解吐温20，具有很强的蛋白酶和几丁质酶活性，可以水解羧甲基纤维素和明胶，不能水解淀粉和纤维素，可以利用柠檬酸盐为唯一碳源，不能利用尿素为唯一氮源。0.1％十二烷基硫酸钠(SLS)对菌株生长具有抑制作用，所测抗生素中，仅对氯霉素(30μg／ml)敏感，对其它如链霉素、卡那霉素、四环素等抗生素均具有较高的耐受水平，溶血试验为β-溶血作用，MacConkey和EMB培养基上均生长良好，测定OH11的G+C含量为69.8 mol％。 脂肪酸分析表明OH11与L.enzymogenes ATCC29487的脂肪酸组分与比率有很多相似，六种主要脂肪酸11:0 iso、11:0 iso 30H、15:0 iso、16:0、17:0 iso和is0 7:1 w9c均占菌体总脂肪酸含量的70％以上。16S rDNA序列同源性分析表明OHll与L.enzymogenes菌株DSM2043<'T>的同源性达99％，与L.enzymogenes C3菌株的同源性高达100％。 通过表形特征、生理生化测定、脂肪酸分析和16S rDNA序列分析，确定OH11为产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)，属于变形菌门(proteobacteria)，γ-变形菌纲(γ-proteobacteria)，黄单胞菌目(Xanthomonadales)，黄单胞菌科(Xanthomonadaceae)、溶杆菌属(Lysobacter)。 在确定了OH11分类地位的基础上，对OH11的防治效果进行了初步研究，明确了菌株OH11代谢产物达到最高拮抗活性的最适条件为温度30℃，起始pH值7.5，且代谢产物活性趋于最高的时间在菌体生长趋于最大值24h之后。OH11主要通过分泌代谢产物，抑制茵丝的正常生长、分生孢子的萌发及芽管的生长，OH11菌体和代谢产物对线虫也有一定的抑制作用。应用OH11菌悬液对辣椒疫病、番茄青枯病进行温室盆栽试验，防效分别为83.6％和86.4％，为进一步大田应用奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

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引言

上篇文献综述 第一章 植物病害生物防治研究进展

上篇文献综述 第二章 新型生防菌产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes)研究进展

下篇研究内容 第一章 植物病害生防细菌的筛选

下篇研究内容 第二章 新型生防菌株OH11的鉴定

下篇研究内容 第三章 产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes)OH11防治效果的初步研究

下一步工作设想

附录

攻读硕士期间发表的论文

致谢