绵羊生长及肌内脂肪部分相关基因表达的发育性变化研究

摘要

为了给绵羊生长及肌内脂肪的研究提供基础资料，本文以2～120目龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊(120日龄的只有新疆细毛羊)为试验对象，探讨了生长和肌内脂肪部分相关基因表达的发育规律和特点。本研究主要测定了两品种绵羊的累积生长曲线；用索氏抽提法测定肌内脂肪含量：以GAPDH基因为内标，用：real time PCR法对影响生长和肌内脂肪含量的部分相关基因的表达进行了相对定量分析；并对各基因表达的相关性，基因表达与生长及肌内脂肪含量的相关性进行了分析。研究结果如下： 1．绵羊ghrelin及其受体基因表达的发育性变化 (1)哈萨克羊早期生长发育比新疆细毛羊快；(2)哈萨克羊的下丘脑、垂体、心脏、肝脏、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠和肌肉中均有ghrelin mRNA分布，但在皱胃中的表达量远远高于其他组织(P<0.01)；(3)绵羊皱胃ghrelin mRNA的表达量随着日龄的增加而呈上升趋势，与其累积生长曲线呈正相关。哈萨克羊皱胃ghrelin mRNA的表达量在各日龄都极显著高于新疆细毛羊(P<0.01)。结果表明ghrelin基因可能与绵羊的生长发育密切相关；(4)绵羊下丘脑GHSR mRNA的表达量随着日龄的增加而呈先升后降的趋势。哈萨克羊下丘脑GHSR mRNA的表达量在2～30日龄期间略高于新疆细毛羊，在60～90日龄期间极显著高于后者(：P<0.01)；(5)绵羊垂体GHSR mRNA的表达量随着日龄的增加而呈上升趋势，与绵羊皱胃ghrelin mRNA的表达及累积生长曲线呈正相关，哈萨克羊垂体GHSR mRNA的表达量在2～90日龄期间极显著高于新疆细毛羊(P<0.01)，提示ghrelin可能主要通过垂体而非下丘脑的GHSR来影响绵羊的生长发育。 2．绵羊下丘脑GHRH和SS基因表达的发育性变化 (1)绵羊下丘脑GHRH mRNA的表达量在90日龄前持续上升，新疆细毛羊的表达量在90日龄后开始回落；哈萨克羊下丘脑GHRH mRNA的表达量在2日龄时显著低于新疆细毛羊(P<0.01)，30～90日龄期间都极显著高于新疆细毛羊(P<0.01)，表明GHRH基因可能与绵羊的生长密切相关，而且可能在GH分泌过程中与ghrelin基因起协同作用；(2)绵羊下丘脑SS mRNA的表达量随着日龄的增加而持续下降，仅新疆细毛羊在120日龄时开始略有回升；(3)绵羊下丘脑GHRH mRNA与皱胃ghrelin mRNA的表达都呈正相关；下丘脑SS mRNA与皱胃ghrelin mRNA及下丘脑GHRHmRNA的表达呈负相关，表明SS基因在调控动物生长的过程中，可能与GHRH及ghrelin基因的作用是相反的。3.绵羊垂体GH基因表达的发育性变化 (1)绵羊垂体GHmRNA的表达都随着日龄的增加而逐渐下降，然后趋于水平： (2)绵羊垂体GHmRNA与下丘脑SSmRNA的表达呈正相关，与下丘脑GHRH mRNA及皱胃ghrelin mRNA的表达呈负相关，表明GHRH、SS及ghretin基因对GH 基因的调控可能不是在mRNA水平进行的。4.绵羊肝脏GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达的发育性变化(1)绵羊肝脏GHR mRNA的表达量在2日龄时较高，30日龄时降到最低点，然后持续上升。30日龄后的变化趋势与绵羊的累积生长曲线呈正相关，表明绵羊肝脏GHR在绵羊生长发育的调控中可能起着重要作用。哈萨克羊的表达量在2～90日龄期间都低于新疆细毛羊，但仅在2和90日龄时达到了极显著水平(P<0.01)；(2)绵羊肝脏IGF-1 mRNA的表达量呈先升后降的趋势，在2～60日龄期间与累积生长曲线呈正相关，在30～90日龄期间与肝脏GHR mRNA的表达呈正相关，表明GHR可能通过IGF来调控动物的生长发育。哈萨克羊在60日龄时出现峰值，新疆细毛羊在90日龄时出现峰值。哈萨克羊的表达量在30～90日龄期间显著高于新疆细毛羊(P<0.05)：(3)绵羊肝脏IGF-IRmRNA的表达在出生后相对比较稳定，2日龄时表达量最高，然后下降并保持较低水平。哈萨克羊的表达量在2～90日龄期间都极显著低于新疆毛羊(P<0.01)。5.绵羊肌肉GHR、IGF-1和JGF-1R基因表达的发育性变化(1)绵羊肌肉GHR mRNA的表达量随着日龄的增加而先升后降，然后趋于水平，30日龄时出现峰值，与肝脏的表达模式不同，表明绵羊GHR mRNA表达存在组织特异性。哈萨克羊的表达量在2～90日龄期间极显著低于新疆细毛羊(P<0.01)；(2) 绵羊肌肉IGFI-l mRNA的表达量随着日龄的增加而呈先升后降的趋势，其中哈萨克羊的峰值出现于30日龄，新疆细毛羊的峰值出现于60日龄。哈萨克羊的表达量在2和90日龄时与新疆细毛羊差异不显著(P>0.05)，在30-60日龄期间极显著低于新疆细毛羊(P<0.01)；(3)绵羊肌肉IGF-lR mRNA的表达呈先升后降的趋势，哈萨克羊表达的基础水平较低，30日龄时出现小的峰值，新疆细毛羊表达的基础水平较高，60日龄时出现峰值。哈萨克羊的表达量在2～60日龄期间都极显著低于新疆细毛羊(P<0.01)，但在90日龄时显著高于新疆细毛羊(P<0.05)。6.绵羊下丘脑GHR和垂体IGF-IR基因表达的发育性变化(1)绵羊下丘脑GHR mRNA和垂体IGF-lR mRNA的表达量在出生后都呈下降趋势，与垂体GHmRNA的表达呈正相关，表明在下丘脑和垂体中可能都存在GH的反馈调控机制。(2)绵羊垂体下丘脑GHR mRNA和IGF-1R mRNA表达的品种差异都较小，提示绵羊下丘脑GHR和垂体IGF-lR基因对GH的负反馈地调节可能主要影响GH的基础水平。 7.绵羊肌肉日IFABP和PPAR7基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响 (1)随着日龄的增加，哈萨克羊肌肉的IMF含量持续上升，而新疆细毛羊的IMF含量在120日龄前几乎没有变化；(2)绵羊H-FABP mRNA表达的品种差异较大。哈萨克羊H-FABPmRNA的表达量在2日龄时最高，30日龄时降到最低，然后持续上升，各日龄问差异显著(P>0.05)，在30～90日龄期间与IMF含量呈正相关，相关系数为0.737。新疆细毛羊的表达量在2日龄时最高，然后持续下降，到90日龄时降到了最低点，然后上升，各日龄间差异显著。结果表明肛FABP基因在生长发育早期就影响哈萨克羊IMF含量，可以作为影响绵羊IMF含量的候选基因之一；(3)绵羊PPARymRNA表达的品种差异较大。哈萨克羊PPARy mRNA的表达量随着日龄的增加而呈下降趋势，各日龄间差异显著(P<0.05)，在2-90日龄期间与IMF含量呈负相关，相关系数为-0.835。新疆细毛羊的表达量在2～60日龄期间持续上升，各日龄间差异显著(P<0.05)，90日龄时降到最低点，然后上升。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语中英文对照

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引言

第一部分文献综述：第一章ghrelin基因研究进展

第一部分文献综述：第二章动物部分生长轴基因研究进展

第一部分文献综述：第三章畜禽脂肪性状部分相关基因研究进展

第一部分文献综述：第四章real time PCR

第二部分绵羊部分生长相关基因表达的发育性变化：第五章绵羊ghrelin及其受体基因表达的发育性变化

第二部分绵羊部分生长相关基因表达的发育性变化：第六章绵羊下丘脑GHRH和SS基因表达的发育性变化

第二部分绵羊部分生长相关基因表达的发育性变化：第七章绵羊垂体GH基因表达的发育性变化

第二部分绵羊部分生长相关基因表达的发育性变化：第八章绵羊肝脏GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达的发育性变化

第二部分绵羊部分生长相关基因表达的发育性变化：第九章绵羊肌肉GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达的发育性变化

第二部分绵羊部分生长相关基因表达的发育性变化：第十章绵羊下丘脑GHR基因和垂体IGF-1R基因表达的发育性变化

第三部分绵羊IMF部分相关基因表达的发育性变化：第十一章绵羊肌肉H-FABP和PPARγ基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响

结论

创新点

参考文献

附录

攻读博士学位期间发表的论文著作

致谢