银杏达莫注射液对缺氧-再复氧损伤的血管内皮细胞的保护作用

摘要

目的：本研究的目的是通过形态学观察、MTT法、检测细胞上清液中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性来阐明银杏达莫注射液对缺氧-再复氧的人脐静脉内皮细胞的保护作用，探讨该药在冠状动脉缺血再灌注损伤治疗中的内在机制，进而能更好地为冠脉支架植入术后即阻塞血管再通后的血管内皮细胞的保护作用提供综合性的理论基础，更好地指导临床用药，为设计新的抗缺血再灌注治疗方案及开发有效的临床治疗药物提供科学依据。
　　方法：本实验采用人脐静脉内皮细胞株（Human Vascular Endothelial Cells，HUVECs）体外传代培养方法。将血管内皮细胞分为3组，即①正常组：正常血管内皮细胞；②缺氧-再复氧组：用1mmol/L连二亚硫酸钠处理后再给予完全DMEM培养基继续培养24h；③银杏达莫注射液组：缺氧后再加不同浓度银杏达莫注射液的完全DMEM培养基继续培养24小时。通过倒置相差显微镜观察和比较各组内皮细胞在形态上的变化，用MTT法检测细胞吸光度值，采用酶联免疫吸附的方法(ELISA)分别测定细胞上清液中的NO、MDA含量及SOD活性，并进行相关比较。
　　结果：MTT比色法结果显示：缺氧-再复氧组的OD值明显降低，而正常组和银杏达莫注射液组的OD值则明显增高。正常组、银杏达莫注射液组与缺氧-复氧组OD值有显著差异（P＜0.05）。缺氧-复氧组组中的MDA含量增加，而NO含量降低。相反，正常组和银杏达莫注射液组中MDA含量减少，而NO含量增高。正常组、缺氧-复氧组及银杏达莫注射液组细胞培养上清液中MDA、NO含量相比较均有明显差异（P<0.01）。单纯缺氧-复氧组中的SOD活性明显降低，正常组和银杏达莫注射液组中的SOD活性则有所升高。正常组和银杏达莫注射液组与单纯缺氧-复氧组中的细胞培养上清液中的SOD活性具有明显差异（P＜0.01），但正常组和银杏达莫注射液组中的细胞培养上清液中的SOD活性无明显差异（P＞0.05）。
　　结论：银杏达莫注射液对缺氧—再复氧损伤的血管内皮细胞具有保护作用。银杏达莫注射液通过降低MDA含量、提高SOD活性即抗氧化应激作用对缺氧-再复氧损伤的血管内皮细胞产生保护作用。

目录

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英文缩写目录

第一章 前 言

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验细胞株

2.1.2 银杏达莫注射液

2.1.3 实验仪器

2.1.4 主要试剂

2.1.5 试剂的配制

2.2 实验方法

2.2.1 人脐静脉内皮细胞的复苏

2.2.2 人脐静脉内皮细胞的培养

2.2.3实验分组（造模）

2.2.4 用倒置显微镜观察细胞形态

2.2.5 MTT方法检测细胞生存率

2.2.6人一氧化氮（NO）的测定：

2.2.7人丙二醛（MDA）的测定：

2.2.8人超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定：

2.3 统计学分析

第三章 结 果

3.1 银杏达莫注射液对缺氧-复氧损伤的HUVECs形态的影响

3.2 MTT检测结果

3.3各组细胞上清液中NO的检测结果银

3.4各组细胞上清液中MDA的检测结果

3.5各组细胞上清液中SOD的检测结果

第四章 讨 论

第五章 结 论

参考文献

【综述】:心肌再灌注损伤的研究进展

致谢