探讨APS-1患者中AIRE基因新突变位点对AIRE蛋白结构及功能的影响

摘要

目的：收集中国APS-1的病例，通过对病例资料进行分析整理，发现新的导致APS-1的AIRE基因突变位点，并验证该突变位点是否对AIRE蛋白的结构及功能产生影响。
　　方法：(1)获取临床诊断为APS-1患者的病例，采集患者及其家系的血液样本。(2)通过基因测序明确APS-1患者及其家系AIRE基因突变情况。(3)运用酵母双杂交技术检测突变AIRE蛋白的同源二聚化性质。(4)运用流式检测不同质粒转染293T细胞的转染效率。(5)运用RT-qPCR检测外周组织限制性抗原（TRAs）的表达水平，以检测突变AIRE蛋白的功能有无变化。
　　结果：(1)获取临床诊断为APS-1患者的病例1例,对病例信息进行分析整理。(2)明确APS-1患者及其家系AIRE基因突变情况：根据基因测序结果及患者家系的分析发现一个新的AIRE基因突变位点c.206A>C。(3)成功构建酵母双杂交表达载体，酵母双杂交实验结果表明：突变的AIRE蛋白与正常的AIRE蛋白无相互作用，从而提示新AIRE基因突变位点通过影响AIRE蛋白的二聚化特性影响AIRE蛋白的结构。(4)成功构建真核表达载体并转染293T细胞，流式检测结果表明：转染含突变AIRE基因质粒的293T细胞的转染效率及GFP表达量明显低于转染含正常AIRE基因质粒及空载质粒的293T细胞。(5)运用RT-qPCR检测外周组织限制性抗原的表达水平，结果表明：突变AIRE基因可以下调外周组织限制性抗原GAD65及TPH1的表达水平。
　　结论：新发现的AIRE基因突变位点通过影响突变AIRE蛋白的二聚化特性影响其结构，通过下调外周组织限制性抗原（GAD65、TPH1）的表达水平影响AIRE蛋白的功能，进而导致APS-1及一系列自身免疫疾病。本研究通过发现新的AIRE基因突变位点，探索APS-1的致病机制，为国内APS-1的相关研究提供新的依据，同时为APS-1的诊断及治疗提供帮助。

目录

声明

英文缩略词表

引言

材料与方法

1.1 仪器和设备

1.1.1实验仪器设备和试剂耗材

1.1.2试剂与药品

1.1.3主要实验溶液的配制

1.2.1病例采集

1.2.2酵母表达载体的构建

1.2.3真核表达载体的构建

1.2.4质粒提取

1.2.5酵母双杂交实验

1.2.6细胞转染

1.2.7流式检测

1.2.8RT-qPCR

1.2.9结果统计分析

结果

第一部分 收集临床诊断为APS-1患者的病例,对病例进行分析整理

第二部分 明确APS-1患者及其家系AIRE基因突变情况

3.1构建酵母双杂交表达载体

3.2酵母双杂交实验

4.1构建真核表达载体

4.2检测转染效率及荧光表达量

4.3检测外周组织限制性抗原的表达水平

讨论

结论

参考文献

综述:自身免疫性多内分泌腺体综合症I型与自身免疫调节因子基因关系研究

后记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著