可溶性CD40L在儿童特发性血小板减少性紫癜发病机制中的作用研究

摘要

研究背景和目的：特发性血小板减少性紫癜(Idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP)是儿科常见的出血性疾病，发病机制复杂，至今尚未完全阐明。早在50年代人们就发现ITP患者的血液中产生了针对自身血小板的抗体，1951年Harrington等发现ITP是由一种能通过胎盘的体液因子引起，将ITP患者的血浆输给正常个体，能使正常个体血小板减少；Shulman等随后研究发现，抗血小板因子是一种免疫球蛋白；1975年Dixon等首次用定量方法检测了血小板表面的免疫球蛋白，称为血小板相关抗体(PAIg)(Ⅱ期测定)，而该抗体与血小板膜gpⅡb/Ⅲa、gpⅠb/Ⅸ等自身抗原有交叉抗原抗体反应，而导致血小板破坏增多。大量研究证实，抗血小板抗体在ITP的发病中起到关键的作用。 目前认为ITP的发病机制系在一定的遗传素质的基础上，在有关诱因的作用下使机体免疫功能紊乱，特别是T细胞活性过度增强，B细胞多克隆激活，产生抗血小板的自身抗体，使血小板在网状内皮系统内破坏，从而引起血小板减少，产生各种临床症状。免疫反应的发生依赖于T细胞的活化，而T细胞的活化除了需要抗原-MHC复合物信号外，还需要有第二信号刺激，即抗原非特异性共刺激分子的协同。若缺乏共刺激分子，则T细胞不能被有效的激活，而进入无反应状态或免疫耐受，若共刺激分子过度表达，则可激活自身反应性T细胞，导致自身免疫性疾病的发生。 近年来，随着免疫学，分子遗传学技术的发展，人们对共刺激分子的认识越来越深刻，其与ITP之间的关系也日益引起人们的重视；其中B7家族是公认的重要的共刺激分子，但许多研究结果显示仅仅阻断该途径还不能抑制自身特发性疾病、移植排斥反应及移植物抗宿主反应的发生，CD40/CD40L作为另一条重要的共刺激途径引起了人们广泛的关注。 本研究通过测定ITP患儿外周血血浆中可溶性CD40L(sCD40L)水平，抗血小板抗体的水平及单个核细胞中sCD40LmRNA的表达水平，来探讨CD40/CD40L与ITP发病机制的关系，为临床应用抗CD40L单抗提供实验依据。 材料和方法ITP患儿30例，其中又分为aITP和cITP，于治疗前及应用激素，丙种球蛋白治疗后血小板升至正常时(血小板计数＞100×109/L)各收集外周血标本一份。收集30例健康体检儿童的外周血标本作为对照组，同时记录其发病时间、年龄、性别等临床资料。采用ELISA法分别测出血浆中sCD40L和PAIgG的浓度，密度梯度离心法分离出单个核细胞，提取细胞总RNA,逆转录成cDNA并进行PCR扩增，测定ITP患儿与正常对照者sCD40LmRNA的表达水平。统计分析采用两样本均数比较的显著性检验-t检验及相关性分析，以a=0.05作为显著性水准。 结果1.ITP患儿治疗前外周血sCD40L的浓度与正常人相比显著增高(p＜0.05)，治疗后ITP患儿外周血sCD40L的水平较治疗前显著降低(p＜0.05)；sCD40L的水平与临床分型无关；若数值大于正常人的均数+2标准差视为阳性，则sCD40L阳性病人血小板数显著降低，血小板抗体IgG显著增高。 2.sCD40LmRNA正常人及ITP患儿治疗前后差异无显著性(p＞0.05). 3.血浆中IgG浓度与血小板计数呈负相关(r=-0.83,p＜0.05)。 结论1.sCD40L与ITP的发病有关； 2.sCD40LmRNA的表达与儿童ITP的发病无关，但其结构是否有突变及其功能是否有异常有待我们进一步研究。 3.抗sCD40L单抗具有良好的应用前景。

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结 果

讨 论

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CD40/CD40L与儿童特发性血小板减少性紫癜

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