β-隐黄素对大鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收的影响

摘要

背景：
　　在牙周炎病变过程中，炎性细胞因子和化学因子的存在上调了核因子κB受体活化因子配体（Receptor activator of nuclear factor-kappa Bligand，RANKL）的表达，RANKL活化破骨细胞（Osteoclast，OC）前体细胞，随后成熟的多核OC吸附到矿化的骨基质表面进行骨吸收。牙槽骨吸收是导致牙齿松动和脱落的主要原因。预防牙槽骨的吸收，促进牙槽骨的修复和再生是治愈牙周炎的关键。
　　β-隐黄素是一种发现于水果和蔬菜中的类胡萝卜素。β-隐黄素可以通过刺激成骨细胞（Osteoblast，OB）形成骨，抑制OC吸收骨来预防骨组织的丧失。以往的研究发现血清中低水平的β-隐黄素和牙周炎患病率增加有关，牙周炎患者血清中β-隐黄素水平明显较低；β-隐黄素可以抑制内毒素（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的炎症反应，上调骨保护素（Osteoprotegerin，OPG）/RANKL的比值；注射β-隐黄素可以抑制LPS-诱导的小鼠牙槽骨骨密度（Bone mineral density，BMD）的降低。这些研究表明，β-隐黄素影响牙周炎的发生发展。然而，关于β-隐黄素对牙周炎牙槽骨吸收的影响研究较少，且其作用机理尚不十分明确。
　　目的：
　　本研究的目的是通过检测牙槽骨丧失量（Alveolar bone loss, ABL）、OC数目、RANKL及OPG的表达来评估β-隐黄素对大鼠实验性牙周炎牙周组织的作用，检测其对牙周炎牙槽骨吸收的影响并分析其作用机制。
　　方法：
　　30只雄性SD大鼠随机分为三组：
　　1）正常对照组（N）;
　　2)牙周炎模型组（P）;
　　3)β-隐黄素干预组(E)。
　　P组、E组进行实验性牙周炎造模，E组在造模的同时用β-隐黄素进行干预。实验性牙周炎模型的诱导:直径0.2mm的正畸结扎丝环绕在双侧上颌第二磨牙牙颈部，同时在颊侧牙龈龈沟内注射大肠杆菌 LPS（30μl/鼠)，每48h注射1次，共3次。作为对照，N组注射等量的生理盐水。β-隐黄素干预: E组在注射LPS后在相同位点注射β-隐黄素（12μl/鼠），每48h1次，共3次。P组注射等量的玉米油代替。实验第8天大鼠腹腔注射过量的10％水合氯醛处死，取双侧上颌组织（含牙齿、牙龈、牙周膜、牙槽骨）。右侧上颌组织进行形态学分析，测量釉牙骨质界(Cemento-enamel junction,CEJ)到牙槽嵴顶(Alveolar bone crest,ABC)的距离。左侧上颌组织进行组织学和免疫组织化学分析，检测牙槽嵴顶附近RANKL及OPG的表达。用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatasem,TRAP)检测OC的数目。
　　结果：
　　P组与N组相比，ABL增加、结合上皮（junctional epithelium，JE）根方迁移、牙槽骨吸收明显，表明P组牙周炎建模成功。E组与P组相比，ABL减少，炎症细胞浸润减少，RANKL免疫标记细胞及 TRAP阳性多核细胞减少，OPG基因表达上调（P＜0.05）。而E组与N组相比，ABL和OC数目差异无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　β-隐黄素影响牙周炎的发生发展，抑制了牙周炎牙槽骨丧失。其可能的作用机制是通过下调RANKL/OPG的比值,减少OC的数目而发挥作用。

目录

声明

缩略词表

1 引言

2 主要实验试剂和仪器设备

2.1 主要实验试剂

2.2 主要仪器设备

2.3 主要试剂的配制

3 实验方法

3.1 实验动物以及分组

3.2 实验动物标记及大鼠固定装置制作

3.3 实验动物建模

3.4 β-隐黄素干预

3.5 实验标本采集

3.6 形态学分析

3.7 常规切片制作和免疫组织化学染色

3.8 统计分析

4 实验结果

4.1 一般情况

4.2 形态学分析

4.3 组织病理学结果

4.4 TRAP染色分析

4.5 RANKL和OPG的免疫组织化学分析

5 讨论

5.1 牙周炎动物模型的建立

5.2 β-隐黄素对牙周炎牙槽骨吸收的影响

5.3 β-隐黄素对OC数目的影响

5.4 β-隐黄素对RANKL、OPG特异性表达的影响

5.5 β-隐黄素的抗炎作用

5.6 β-隐黄素对牙周炎牙周组织的氧化应激反应可能有影响

6 结论

参考文献

综述:β-隐黄素对人类健康的影响

个人简历及攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢