泻剂结肠大鼠回肠和横结肠VIP、肠嗜铬细胞损害的可复性研究

摘要

目的：本研究课题在大鼠泻剂结肠模型建立后，进行恢复性饲养，通过观察大鼠回肠和横结肠5-HT免疫反应阳性的肠嗜铬细胞密度变化以及VIP免疫反应性变化，探讨肠嗜铬细胞、VIP神经元在停用泻剂后的恢复情况，了解肠神经系统损伤后的可逆转性，为临床工作提供理论依据。 方法： 1.动物分组：选取健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，按照完全随机的方法进行分组，实验组80只，随机分为便秘组一与便秘组二各40只，对照组40只，分组后各组间体重、性别无显著性差异。 2.动物处理：便秘组一与便秘组二采用大黄浸液灌胃，首日剂量为800mg/kg(生粉)，此后每日剂量在前一日基础上增加200mg/kg(生粉)，直至实验组出现半数大鼠粪便变稀，保持剂量至80％的稀便消失，继续加量给药，至又有半数大鼠粪便变稀，如此程序循环3次，待实验组第三次80％的稀便消失一周后停止建模，便秘组一继续以维持量大黄灌胃，便秘组二以同等体积蒸馏水灌胃恢复饲养，时间为1个月。对照组从实验开始以同等体积蒸馏水灌胃饲养。 3.取材及标本处理：恢复性饲养1个月后选取便秘组一、便秘组二、对照组大鼠各20只，分别切取距回盲瓣5cm处回肠及横结肠标本，进行HE染色、肠嗜铬细胞、VIP免疫组化染色，光镜下观察结肠壁的变化，肠嗜铬细胞数量及形态变化，对VIP免疫组织化学染色行半定量分析及图像分析。 4.统计分析：数据采用SAS软件进行统计学处理分析，对所测定结果进行正态性及方差齐性检验，组间比较采用单因素方差分析检验，有差别者用q检验进一步两两比较，结肠肌间神经丛VIP阳性神经元免疫组织化学染色半定量结果，选用多个样本比较的秩和检验(Kruskal-wallis法)及多个样本两两比较的秩和检验(Nemenyi法)，检验水准α=0.05。 结果： 1.肠道大体病理变化及HE染色：三组大鼠肠道外观无明显差别，结肠粘膜无色素沉着。对照组大鼠肠道切片HE染色未发现病变，便秘组一大鼠肠道切片HE染色可见明显粘膜慢性炎症改变。便秘组二可见粘膜慢性炎症改变，较便秘组一减轻。 2.肠嗜铬细胞染色：便秘组一、便秘组二及对照组大鼠肠道所有切片的粘膜层中均可见5-HT免疫反应阳性的肠嗜铬细胞，胞质和胞突中有棕色或棕黑色颗粒，核呈蓝色，背景呈淡黄色，对比鲜明，5-HT免疫反应阳性的肠嗜铬细胞形态多样，如锥形、梭形、圆形、椭圆形、杆形等。便秘组一大鼠肠道5-HT免疫反应阳性的肠嗜铬细胞密度高于对照组。便秘组二大鼠肠道5-HT免疫反应阳性的肠嗜铬细胞密度低于便秘组一但高于对照组。 3.VIP染色：光镜下观察发现，正常大鼠结肠肌问神经丛内VIP神经纤维呈“网状”分布，其神经节粗大，阳性神经元密集分布，胞体较大，节间束较粗，束内神经纤维分布密集，可见散在分布的阳性神经元。与对照组大鼠相比，便秘组大鼠结肠肌间神经丛VIP阳性神经节及节间束细小，节内神经元数量明显减少，节间束内神经纤维分布稀疏，阳性神经元胞体少见。图像分析显示，便秘组一大鼠结肠肌间神经丛内VIP阳性神经元面密度明显低于对照组大鼠。便秘组二大鼠肠肌间神经丛内VIP阳性神经元面密度面密度高于便秘组一但低于对照组。 结论： 1.长期应用大黄，大鼠肠嗜铬细胞对大黄刺激逐渐耐受，5-HT释放减少，导致泻剂结肠的产生，停用大黄后肠嗜铬细胞耐受性及5-HT的释放功能出现恢复。 2.泻剂结肠大鼠存在肠壁内VIP神经病理改变和功能障碍，停用大黄后大鼠肠肌间神经丛病理变化出现好转，肌间神经丛VIP免疫反应性较停药前增强，功能出现恢复。

目录

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:慢传输便秘肠道五羟色胺与VIP神经元变化的研究

致谢

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