健脾解毒复方中药对裸鼠肝癌模型的抗癌作用及机制

摘要

研究背景： 原发性肝癌(primary hepatic cancer，PHC)80％-90％是肝细胞癌，是世界上第五大常见恶性肿瘤，第三大恶性肿瘤死亡原因，具有预后差、死亡率高的特点，然而目前的肝癌的治疗方法的作用不甚理想。 肝癌多属于中医学“积聚”、“癥瘕”、“黄疸”、“臌胀”、“胁痛”等范畴。本病的发生是由于正气不足，脏腑功能失调，气滞、血瘀、痰凝、毒聚而形成的。肝癌的病因病机总的来说是本虚标实，以脾虚为本，气滞、血瘀、湿热、毒邪为标。 健脾解毒复方中药是导师陈泽雄副教授使用多年、针对肝癌患者的经验方剂，具有益气健脾、解毒散结、疏肝和血之功。既往导师陈泽雄和师兄胡洪涛研究表明，该方对体外肝癌细胞株端粒酶及细胞增殖有抑制作用。临床研究也说明本方明显改善17ACE术肝癌患者的症状，提高生活质量。师兄孙保国采用本方干预荷瘤裸鼠，发现中药组总存活率高于化疗组，肝内转移少于化疗组，并可明显增加PTEN蛋白的表达强度，尤其是癌旁组织，中药组组间比较提示中浓度组效果最好，提示中药组抗癌作用与抑癌基因PTEN的高表达有关。但中药组浓度之间跨度较大，干预时间较短，中药如何调控抑癌基因PTEN的表达尚不明确，尤其癌旁组织PTEN的高表达现象目前文献无类似报道。 研究目的： 进一步研究健脾解毒复方中药对间接原位移植雄性裸鼠肝癌模型的抗癌作用及部分相关机制。 1探讨肝癌中PTEN和ERK1与肝癌临床进展的关系及两者的相关性。 2分析不同浓度的健脾解毒中药对肝癌裸鼠的抗癌作用及作用差异。 3分析不同浓度的健脾解毒中药对肝癌组织、癌旁组织、正常组织PTEN和ERK1的调控作用。 材料： 1 造模材料人肝细胞癌细胞株Bel-7402；BALB/c裸鼠，雄性，4～6周龄，100只。 2 干预材料健脾解毒复方中药；FT207片(替加氟片)。 3 试剂兔抗人PTEN单克隆抗体、兔抗人ERK1单克隆抗体、二步法免疫组化检测试剂。 实验方法： 采用人肝细胞癌细胞株Bel-7402间接原位移植，造雄性肝癌裸鼠模型90只，造模后24小时随机分9组，即复方中药A、B、C、D、E、F、G组，FT207化疗组(FT)，生理盐水组(NS)，8周后处死裸鼠，观察各组荷瘤裸鼠的生存时间、瘤体积、瘤指数、肝内转移情况等，并用二步法免疫组织化学检测肝组织、肝癌旁组织、肝癌组织中PTEN和ERK1蛋白的表达。另外10只雄性裸鼠不造模作为正常对照组(DZ)。 结果： 1、解剖证实造模成功率67/88；实验结束获得有效病理标本67例，成瘤以多发小结节为主。 2、生存情况分析：中药组的生存时间和生存率均优于化疗组，p＜0.05，中药组D和E组的生存时间长于生理盐水组，p＜0.05。 3、体重变化分析：中药组荷瘤裸鼠治疗后体重有增加，p＜0.05，化疗组治疗后体重明显下降，p＜0.05。 4、解剖情况分析：中药组的肝指数和脾指数均大于化疗组，p＜0.05。中药组中C、E、F组脾指数比化疗组大，p＜0.05,C组脾脏比D组脾指数大，p＜0.05。 5、抑癌基因PTEN表达分析：荷瘤裸鼠肝脏PTEN蛋白表达强度正常肝组织最高，癌旁次之，肝组织最少。中药组B、D、E组PTEN在正常肝组织的表达高于生理盐水组、化疗组、正常照组，p＜0.05。中药组D组PTEN在癌旁组织的表达高于生理盐水组，p＜0.05，中药组在癌组织中PTEN的表达高于生理盐水组和化疗组，p＜0.05。 6、ERK1表达分析：荷瘤裸鼠肝脏ERK1蛋白表达强度癌组织最高，癌旁次之，肝组织最少，癌旁组织ERK1表达强度化疗组高于中药组和牛理盐水组，癌组织ERK1表达强度生理盐水组和化疗组的的ERKl的表达均高于中药C、D、E、G、F组。 7、PTEN表达和ERK1表达相关性分析：在癌组织中，PTEN和ERK1的表达呈负相关，且具有统计学意义。 结论： 1、健脾解毒复方中药可以增加荷瘤裸鼠的体重，改善营养状态，延长荷瘤裸鼠的生存时间。 2、荷瘤裸鼠肝脏抑癌基因PTEN蛋白表达强度正常肝组织最高，癌旁次之，癌组织最少，健脾解毒复方中药能够上调荷瘤鼠正常肝组织和癌旁组织抑癌基因PTEN蛋白的表达。 3、荷瘤裸鼠肝脏ERK1蛋白表达强度癌组织最高，癌旁次之，肝组织最少，不同浓度健脾解毒复方中药可以降低癌旁组织和癌组织ERK1表达。 4、在癌组织中，PTEN和ERK1的表达呈负相关。 5、健脾解毒复方中药抗癌作用存在量效关系，以0.375g生药/ml-0.625g生药/ml浓度疗效最佳，浓度太高或太低均影响治疗效果，提示临床中适当的药物剂量的重要性。 6、原发性肝癌的发生中可能存在PTEN的缺失，而在癌组织中可能由于PTEN蛋白表达降低或缺失，不能有效抑制由致癌因子异常激活的ERK1信号传导通路，从而使肝癌细胞增殖。 7、健脾复方解毒中药的抗癌作用机制之一可能上调抑癌基因PTEN蛋白的表达，从而抑制ERK1信号通路，抑制肝癌细胞增殖。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词对照表

声明

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章研究结论

第六章问题及展望

参考文献

附图

在学期间科研情况

致谢