奥沙利铂对不同转移潜能的人结肠癌细胞株增殖和凋亡的影响

摘要

目的:
　　探讨奥沙利铂（L-OHP）体外对人结肠癌细胞SW480和SW620增殖和凋亡的影响及其可能机制。
　　方法:
　　1.MTT比色法检测用不同质量浓度(2、4、8、16、32和64μ g/mL)L-OHP与SW480和SW620细胞作用24、48和72 h后对增殖抑制作用的影响。
　　2.DAPI染色观察经不同质量浓度（4、16和64μ g/mL）L-OHP处理24 h后细胞核形态的变化。
　　3.流式细胞术检测用不同质量浓度（1/2IC50和IC50）L-OHP处理24 h后SW480和SW620细胞周期和凋亡率。
　　4.Western blot法检测经不同质量浓度（4、16和64μ g/mL）L-OHP处理24 h后SW480和SW620细胞中凋亡相关蛋白Bax和Caspaes-3蛋白的表达水平以及DNA损伤相关蛋白γ HA2X蛋白的表达水平。
　　结果:
　　1.L-OHP对SW480和SW620细胞的增殖有明显的抑制作用且呈时间-剂量依赖性（P＜0.05）。SW620细胞对L-OHP的敏感性明显高于SW480细胞（P＜0.05）。
　　2.L-OHP作用于SW480和SW620细胞24 h后，随着药物浓度的增加正常细胞数目减少，出现细胞核固缩、多核、核碎裂及凋亡小体的细胞数目明显增加（P<0.05）。相同浓度L-OHP作用下，SW620细胞中出现细胞核固缩、多核、核碎裂及凋亡小体的细胞的比例明显较SW480细胞中高（P<0.05）。
　　3.L-OHP对SW480和SW620细胞的有明显的促进早期凋亡的作用且呈时间-剂量依赖性（P＜0.05）。相同浓度 L-OHP作用下对 SW620细胞促进早期凋亡的作用明显大于SW480细胞（P<0.05）。
　　4.自然对数增殖周期，SW620细胞 S期细胞比例低于 SW480细胞，而G1期细胞比例高于SW480细胞（P<0.05）。用不同质量浓度的L-OHP（1/2IC50、IC50）作用24 h,SW480细胞G1期细胞比例随浓度增高而显著降低，G2/M期细胞比例显著升高（P<0.05），SW620细胞G1期细胞比例随浓度增高而显著降低。S期细胞比例显著升高（P<0.05）。
　　5.L-OHP作用于SW480和SW620细胞24 h后，随着药物浓度的增加SW480和SW620细胞中凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3蛋白以及DNA损伤相关蛋白γHA2X蛋白的表达量明显增加（P<0.05）。相同药物浓度下SW620细胞中凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3蛋白以及DNA损伤相关蛋白γ HA2X蛋白的表达量明显较SW480高（P<0.05）。
　　结论:
　　1.L-OHP对二种结肠癌细胞株都有明显的增殖抑制作用，且对 SW620细胞的抑制作用明显大于SW480细胞。
　　2.L-OHP主要通过阻滞细胞于G2/M期或S期抑制二种肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。
　　3.L-OHP诱导二种肿瘤细胞凋亡的机制可能是通过上调促凋亡蛋白Bax和启动Caspaes级联反应来实现的。DNA损伤可能也是其促进凋亡的机制之一。但二者之间的具体联系还需进一步实验来探讨。

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第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 细胞系

2.1.2主要试剂与仪器

2.1.3主要药品和试剂配制

2.2 试验方法

2.2.1 细胞培养及处理

2.2.2 MTT比色法检测L-OHP对二种肿瘤细胞的增殖抑制率

2.2.3 DAPI染色观察L-OHP对肿瘤细胞核形态改变

2.2.4 Annexin V/PI双染法流式细胞仪检测 L-OHP 对肿瘤细胞凋亡的影响

2.2.5 流式细胞仪检测L-OHP对肿瘤细胞周期的影响

2.2.6 蛋白质印迹法检测γH2AX、Bax和Caspase-3蛋白的表达

2.3 统计学方法

第三章 结 果

3.1 L-OHP对人结肠癌细胞SW480和SW620的增殖抑制作用

3.2 DAPI染色观察L-OHP对二种肿瘤细胞细胞核形态的影响

3.3 L-OHP对人结肠癌细胞SW480和SW620细胞凋亡的影响

3.4 L-OHP对人结肠癌细胞SW480和SW620细胞周期的影响

3.5 L-OHP 对人结肠癌细胞 SW480 和 SW620 细胞 γH2AX、Bax 和Caspase-3蛋白表达的影响

第四章 讨 论

第五章 结 论

参考文献

附录

第六章 综述:奥沙利铂体外诱导人结直肠癌细胞凋亡机制的研究进展

在学期间的研究成果

致谢